[发明专利]一种1,5-脱水山梨醇检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明涉及一种1,5‑脱水山梨醇检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，试剂R1的各组分及浓度包括：20‑100mmol/L的第一缓冲液、1‑20KU/L的葡萄糖激酶、0.5‑5KU/L的丙酮酸激酶、0.2‑1mmol/L的三磷酸腺苷、1‑3mmol/L的磷酸烯醇式丙酮酸钾、0.5‑2mmol/L的4‑氨基安替比林、1‑5ml/L的表面活性剂、0.5—10g/L的谷胱甘肽、0.8‑2.0ml/L的防腐剂、5‑20mmol/L的氯化镁。试剂R2的各组分及浓度包括：20‑100mmol/L的第二缓冲液、20‑125KU/L的吡喃糖氧化酶、15‑60KU/L的过氧化物酶、1‑10mmol的色原、1‑5ml/L的表面活性剂、0.8‑2.0ml/L的防腐剂。本发明的优点是：灵敏度高、稳定性好、线性范围宽。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种1,5-脱水山梨醇试剂盒及其制备方法。

背景技术

1,5-AG(1,5-脱水山梨醇)与现有的糖尿病指标均呈现出显著的负相关，血液中1，5-AG的减少程度与糖尿病的严重程度显著相关。1,5-AG可以反映近几天至1周的平均血糖水平，因此1,5-脱水山梨醇检测效果受到了越来越多的重视。

已有的检测1,5-脱水山梨醇的试剂和检测方法存在着灵敏度和重复性差、准确性低的缺陷，限制了它的应用。因此，应该提供一种新的技术方案解决上述问题。

发明内容

本发明的目的是：提供一种可明显改善重复性和灵敏度的1,5-脱水山梨醇检测试剂盒及其制备方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种1,5-脱水山梨醇检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：

所述试剂R2的各组分及浓度包括：

进一步的技术方案：

所述试剂R1中的第一缓冲液和试剂R2中的第二缓冲液分别为磷酸钾缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液、Tris缓冲液中的一种或两种以上的混合物。

所述试剂R1、R2中的防腐剂分别为叠氮钠、Proclin950、Proclin300、硫柳汞中的一种或两种以上的混合物。

所述试剂R1、R2中的表面活性剂为吐温20、曲拉通X-100、聚乙烯吡咯烷酮、辛基苯基聚氧乙烯醚中的一种或两种以上的混合物。

所述试剂R2中的色原为N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐、3-羟基-2,4,6-三碘苯甲酸中的一种。

一种1,5-脱水山梨醇检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤，

(1)、试剂R1制备

在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器转速至200-300rpm，使搅拌保持匀速状态，按照以上浓度要求，边搅拌边投入第一缓冲液，搅拌至物料完全溶解、配液罐底部无沉淀，之后投入葡萄糖激酶、丙酮酸激酶、三磷酸腺苷、磷酸烯醇式丙酮酸钾、4-氨基安替比林，待物料完全溶解后再按照上述投料方式依次投入谷胱甘肽、氯化镁、表面活性剂和防腐剂，投料完成后，继续搅拌至全部物料完全溶解，配液罐底部无沉淀，调整PH值在6.50-8.00之间，并定容至最终体积；

溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；

(2)、试剂R2制备