[发明专利]一种多级逆流-复合酶解制备河豚鱼皮活性肽的方法

权利要求书

1.一种多级逆流-复合酶解制备河豚鱼皮活性肽的方法，其特征在于包括原料预处理、多级逆流-酶解耦合提取、纯化、干燥四个步骤，所述方法的具体步骤如下：

1）原料预处理：将含水量30-50%的河豚鱼皮打浆至呈糊状，混合均匀后投入多级逆流罐组中进行多级逆流-酶解耦合提取；

2）多级逆流-酶解耦合提取：设置3-5个浸泡提取罐连续逆流操作，在提取过程中，通过对提取水溶液的逆向转移实现提取相和提余相的逆向操作，将溶出的活性多肽及时移出，使各罐组之间形成浓度梯度；逆向提取过程中保持罐内温度40-60℃，pH 6.0-8.0，反应0.5-2h，添加蛋白酶中的一种或多种的组合，通过酶解提高功能活性成分溶出率，最终提取液由第一级即投料罐中排出，提余相即提取后的残渣从最后一级即提取水的加入罐中排出，得到酶解提取液；

3）纯化：将酶解提取液过滤或离心，将得到的滤液或离心液通过截留分子量为2000-3500Da的超滤膜，并达到脱盐、脱蛋白的目的，得到超滤浓缩液；

4）干燥：超滤浓缩液进一步浓缩至固形物达到25-35%，得到河豚鱼皮活性肽。

2.根据权利要求1所述的一种多级逆流-复合酶解制备河豚鱼皮活性肽的方法，其特征在于所述步骤2）中蛋白酶的加入量为每千克河豚鱼皮原料500个酶活力单位，所述蛋白酶的最佳酶解条件为：提取罐内pH为8.0，酶解温度为45℃，保温时间为1小时。

3.根据权利要求1所述的一种多级逆流-复合酶解制备河豚鱼皮活性肽的方法，其特征在于所述步骤2）中的蛋白酶为中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶中的一种和几种的组合。

4.根据权利要求1所述的一种多级逆流-复合酶解制备河豚鱼皮活性肽的方法，其特征在于所述蛋白酶为中性蛋白酶和风味蛋白酶的组合，其质量比为3:1。

5.根据权利要求1所述的一种多级逆流-复合酶解制备河豚鱼皮活性肽的方法，其特征在于所述步骤3）中的过滤操作中滤布的目数为600-1000目；所述步骤3）中的离心操作中离心转速为5000转/分，离心时间为10min。

6.根据权利要求1所述的一种多级逆流-复合酶解制备河豚鱼皮活性肽的方法，其特征在于所述步骤2）中添加一定量的果胶酶，加入量为每千克河豚鱼皮原料200个酶活力单位。

7.根据权利要求1所述的一种多级逆流-复合酶解制备河豚鱼皮活性肽的方法，其特征在于所述方法的具体步骤如下：

1）原料预处理：将含水量30-50%的河豚鱼皮打浆至呈糊状，混合均匀后投入多级逆流罐组中进行多级逆流-酶解耦合提取；

2）多级逆流-酶解耦合提取：设置3级逆流提取罐连续逆流操作，一级罐保持温度45℃，二级罐温度45℃，三级罐温度45℃，调节各罐pH为8.0，按每千克河豚鱼皮原料500个酶活力单位加入蛋白酶，200个酶活力单位加入果胶酶，逆流提取1小时，升温至90℃以上，保温15分钟，灭酶活，最终提取液由第一级即投料罐中排出，残渣从三级罐即提取水的加入罐中排出，得到粗提取液；所述蛋白酶为中性蛋白酶和风味蛋白酶的组合，其质量比为3:1；

3）纯化：将酶解提取液过滤或离心，将得到的滤液或离心液通过截留分子量为2000-3500Da的超滤膜，并达到脱盐、脱蛋白的目的，得到超滤浓缩液；其中所述过滤操作中滤布的目数为1000目；所述离心操作中离心转速为5000转/分，离心时间为10min；

4）干燥：超滤浓缩液进一步浓缩至固形物达到25-35%，得到河豚鱼皮活性肽。

8.按权利要求1-7任一项所述方法制备的河豚鱼皮多肽。

9.权利要求8所述河豚鱼皮多肽的应用。