[发明专利]嗜外层视网膜的腺相关病毒病毒体及其应用

说明书

本发明公开了一种嗜外层视网膜的腺相关病毒病毒体及其应用。所述嗜外层视网膜的腺相关病毒病毒体具有氨基酸突变AAV9衣壳蛋白，所述嗜外层视网膜的腺相关病毒病毒体赋予增强的嗜外层视网膜细胞的感染性。其中相对于相应亲本AAV9衣壳蛋白，所述突变AAV9衣壳蛋白的氨基酸序列中第274、446和731位酪氨酸突变为苯丙氨酸。所述药物组合物包含所述嗜外层视网膜的腺相关病毒病毒体和药学上可接受的赋形剂。本发明通过对编码AAV9病毒衣壳进行氨基酸定点突变，获得亲嗜外层视网膜的腺相关病毒突变体，适用于外源治疗基因转导外层视网膜细胞治疗视网膜病变。

技术领域

本发明涉及一种重组AAV病毒体，具体涉及一种在选定的腺相关病毒 (AAV9) 序列中进行氨基酸突变以赋予其亲嗜外层视网膜的方法，以及在携带外源治疗基因转导外层视网膜细胞治疗视网膜病变中的应用，属于基因工程技术领域。

背景技术

视网膜疾病是导致失明的主要原因之一，常见的有黄斑变性、糖尿病视网膜病变、青光眼、遗传性视网膜病变等。其中，大部分病变由基因突变、蛋白不工作或过表达引起异常，进而导致视细胞死亡，最终致盲。通过基因治疗可以介导正确基因或敲除异常基因，恢复正常表达，进而起到恢复视功能作用。

腺相关病毒（Adeno-associated virus，AAV）属于微小病毒科依赖病毒属的一员，它是一个直径约为20~26 nm的二十面体，携带有4.6~4.8 kb的线性单链DNA基因组。目前已经从鸟类和许多哺乳动物包括人的体内分离到13种血清型及120多种突变型的AAV病毒。AAV以非致病性、低免疫原性、稳定表达目的基因等优点成为最有前景的病毒载体，被广泛应用于视网膜病变的基因治疗。AAV作为基因载体在基因治疗应用中有其他病毒载体或非病毒载体所不具备的优点：（1）既可以感染分裂细胞，也可以感染静止细胞；（2）AAV是目前所知的唯一能定点整合到人类基因组特定位点的基因载体，且整合位点安全可靠；最重要的是，虽然80-90%的人类呈AAV阳性，但没有报道AAV引起任何疾病。目前为止，全世界已有33项眼部疾病基因治疗研究进入临床试验，其中有23个临床试验项目是由AAV作为基因治疗载体。美国基因治疗药物公司Spark Therapeutics，用AAV载体携带RPE65基因治疗RPE65基因突变所导致的Leber先天性黑朦（LCA2）的药物，已获得美国FDA批准上市。

已证实AAV可以感染多种视网膜细胞，包括光感受器细胞、视网膜色素上皮细胞(RPE)、Müller细胞、视网膜神经节细胞和角膜内皮细胞。AAV载体进行视网膜疾病基因治疗的给药途径主要有玻璃体注射和视网膜下注射，分别主要靶向内层视网膜和外层视网膜。视网膜下注射会导致一系列并发症，加重机械损伤，导致视功能受损，并且手术操作困难，安全性低。玻璃体注射相对更安全、容易，但对RPE、光感受器等视网膜外层细胞转导率低，因此在治疗靶向RPE光感受器等外层视网膜的疾病中使用率有限。为了提高玻璃体注射的临床使用率，需要提高其对视网膜外层细胞转导效率。

但是，目前尚未有任何关于重组AAV病毒体高效靶向外层视网膜细胞，以用于提高视网膜外层细胞转导效率方面的报道。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种嗜外层视网膜的腺相关病毒病毒体，以克服现有技术中的不足。

本发明的另一目的还在于提供包含前述腺相关病毒病毒体的突变AAV9衣壳蛋白。

本发明的另一目的还在于提供药物组合物及其用于将基因产物递送至个体的外层视网膜细胞的药物中的用途。

为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案包括：

本发明实施例提供了一种嗜外层视网膜的腺相关病毒病毒体，它具有氨基酸突变AAV9衣壳蛋白，所述嗜外层视网膜的腺相关病毒病毒体赋予增强的嗜外层视网膜细胞的感染性。

本发明实施例还提供了包含编码前述嗜外层视网膜的腺相关病毒病毒体的组合物，其包含：