[发明专利]一种参葵通脉颗粒的质量检测方法

权利要求书

1.一种参葵通脉颗粒的质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1） 参葵通脉颗粒供试品溶液的制备：

按重量份数取炙黄芪 200g、灵芝200g、仙灵脾100g、桂枝100g、丹参100g、黄蜀葵100g、茯苓100g和陈皮60g，加水煎煮三次；第一次加总药材重量12倍体积量的水，先浸泡0.5h，然后加热煎煮1.5h，滤过，取滤液；滤渣加12倍体积量水，加热煎煮1.5h，滤过，取滤液；滤渣再加12倍体积量水，煎煮1.5h，滤过，取滤液，合并三次滤液，减压浓缩至60℃相对密度约1.15~1.20，然后在直管式高速离心机上离心，转速：16000 r/ min，流量：4～6L/min；取离心液，浓缩，然后加甲醇适量，溶解，摇匀，过0.45μm滤膜，得供试品溶液；

（2）混合对照品溶液的制备 ：

精密称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷、丹酚酸B和淫羊藿苷对照品适量，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，超声10min制成质量浓度分别为15.66μg·mL^-1、109.7μg·mL^-1、17.04μg·mL^-1的混合对照品溶液；

（3）标准曲线的绘制：

 取步骤（2）的混合对照品溶液，分别稀释2、4、8、10、16、20倍，精密吸取上述系列浓度的对照品混合液各10 μl，注入高效液相色谱仪进行分析；以对照品的浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标，得毛蕊异黄酮葡萄糖苷、丹酚酸B和淫羊藿苷的标准曲线方程分别为y=24.826x+0.3179，r=0.9999、y=12.762x-6.1893，r=0.9999、y=12.228x+1.3942，r=0.9999；

（4）含量测定

取步骤（1）的供试品溶液10 μl，注入高效液相色谱仪进行分析，根据毛蕊异黄酮葡萄糖苷、丹酚酸B和淫羊藿苷对照品的保留时间，将相应峰面积代入步骤（3）的标准曲线方程中，计算毛蕊异黄酮葡萄糖苷、丹酚酸B和淫羊藿苷的含量；

所述的步骤(3)和步骤（4）中的色谱条件为：色谱柱: 岛津 InertSustain AQ-C18 ，250mm×4.6 mm，5 μm；流动相：0.1%磷酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，梯度洗脱；柱温：35℃；流速：1.0mL·min^-1，检测波长286nm；进样体积：10μL；

梯度洗脱条件为：0~30min，85%A→70%A；30~40min，70%A；40-50min，70%A→85%A；50-60min，85%A；

还包括薄层鉴别：

（5）炙黄芪的定性鉴别：

取步骤（1）离心后浓缩液1mL，加入25mL甲醇，超声30min，过滤后置于蒸发皿中，105℃水浴蒸干；蒸干后放至常温，加30mL水溶解，转移至分液漏斗中，加入20 mL水饱和正丁醇溶液萃取，共3次；用氨试液洗涤合并的正丁醇液3次，每次20 mL；待分层，弃去氨液，取正丁醇液蒸干，残渣以甲醇1 mL使全部溶解，得参葵通脉炙黄芪供试品溶液；

取1 g黄芪对照药材，加50 mL甲醇，超声处理30 min后，将滤液蒸干，加入15 mL水溶解全部残渣，加入20 mL水饱和正丁醇溶液萃取，共3次；用氨试液洗涤合并的正丁醇液3次，每次20 mL；待分层，弃去氨液，取正丁醇液蒸干，残渣以甲醇1 mL使全部溶解，得黄芪对照药材溶液；

吸取参葵通脉炙黄芪供试品溶液和参葵通脉黄芪对照药材溶液各10μl，点于硅胶G薄层板上，以体积比为13:6:2的三氯甲烷-甲醇-10%氢氧化钠溶液的下层溶液为展开剂，以10%硫酸乙醇液显色，于105℃加热至斑点清晰，日光下检视；在相同色谱位置上参葵通脉炙黄芪供试品与黄芪对照药材均显相同颜色的斑点；

（6）丹参定性鉴别

取步骤（1）离心后浓缩液1mL，加20 ml水稀释，并用稀盐酸调pH至2后，用乙醚萃取2次，每次20ml，合并萃取后收集的乙醚液，105℃水浴挥干，残渣加2 ml乙醇溶解，得参葵通脉丹参供试品溶液；

取1 g丹参对照药材，加水100ml，煮沸30min，过滤，滤液浓缩至20ml，放至室温，并用稀盐酸调pH至2后，用乙醚萃取2次，每次20ml，合并萃取后收集的乙醚液，105℃水浴挥干，残渣加2 ml乙醇溶解，得丹参对照药材溶液；

吸取上述参葵通脉丹参供试品溶液和丹参对照药材溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4:2:0.1苯-乙酸乙酯-甲酸作为展开剂，喷以1%三氯化铁与1%铁氰化钾1:1混合液后，105℃恒温加热至斑点显色清晰，365nm紫外灯光检视；在相同色谱位置上，参葵通脉丹参供试品与丹参对照药材显相同的紫色斑点；

（7）淫羊藿定性鉴别

取步骤（1）离心后浓缩液1ml，加20ml 乙醇超声处理20min，过滤，滤液蒸干，残渣加1ml乙醇溶解作为参葵通脉颗粒淫羊藿供试品溶液；

另取淫羊藿对照药材0.5g，加水100ml煮沸30min，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇20ml溶解制成淫羊藿对照药材溶液；

吸取参葵通脉颗粒淫羊藿供试品溶液和淫羊藿对照药材溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15:10:10的乙酸丁酯-甲酸-水为展开剂，展开，喷以5%三氯化铝，105℃恒温加热至斑点显色清晰，365nm紫外灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显示相同颜色的斑点；

（8）陈皮定性鉴别

取步骤（1）离心后浓缩液1ml，加20ml甲醇超声处理20min，过滤，滤液蒸干，残渣加1ml甲醇溶解，作为参葵通脉颗粒陈皮供试品溶液；

另取陈皮对照药材0.5g，加甲醇10ml，超声20min，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解制作成陈皮对照药材溶液；

吸取参葵通脉颗粒陈皮供试品溶液和陈皮对照药材溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15:10:10的乙酸丁酯-甲酸-水为展开剂，展开，喷以5%三氯化铝，105℃恒温加热至斑点显色清晰，365nm紫外灯光检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显示相同颜色的斑点。