[发明专利]多重交联半月板修复用水凝胶及其制备方法

权利要求书

1.一种多重交联半月板修复用水凝胶的成套原料试剂，由第一组分和第二组分构成，其特征是，所述第一组分为改性的胶原类物质，所述改性的胶原类物质具有含巯基和氨基的侧链，所述胶原类物质为胶原、去端肽胶原、明胶、胶原肽之一；所述第二组分为改性的多糖，所述改性的多糖具有含醛基和琥珀酰亚胺的侧链，所述多糖为透明质酸、葡聚糖、海藻酸钠、几丁质、淀粉之一；

所述第二组分由以下方法制得：

P1. 将所述多糖溶于纯化水以形成多糖溶液，向多糖溶液中加入高碘酸钠，避光反应；

P2. 反应后，向反应液中加入阳离子交换树脂进行交换反应；

P3. 交换反应后，除去阳离子交换树脂，向反应液中加入四丁基氢氧化铵进行反应；在反应后对反应液进行醇沉，并将沉淀进行干燥；

P4. 将干燥后沉淀溶于DMSO中形成DMSO溶液，向DMSO溶液中加入琥珀酰亚胺磷酸二苯酯进行反应；在反应后向反应液加正己烷并取沉淀，以丙酮洗涤沉淀后，将沉淀进行干燥，即得第二组分。

2.根据权利要求1所述的多重交联半月板修复用水凝胶的成套原料试剂，其特征是，所述第一组分由以下方法制得：

M1. 将所述胶原类物质溶于醋酸溶液以形成胶原-醋酸溶液，向胶原-醋酸溶液中加入活化剂进行活化反应；所述活化剂为EDC与NHS的组合物，或DMTMM；

M2. 活化反应后，向反应液中加入巯基化试剂和氨基化试剂进行接技改性反应；所述巯基化试剂为胱胺，所述氨基化试剂为己二酰二胺、碳酰胺、乙二胺、或丁二胺；

M3. 接技改性反应后，向反应液中加入还原剂进行还原反应；所述还原剂为TCEP或DTT；

M4. 还原反应后，将反应液透析或超滤，并将所得产物冻干即得第一组分。

3. 根据权利要求2所述的多重交联半月板修复用水凝胶的成套原料试剂，其特征是，M1中，所述胶原-醋酸溶液中胶原类物质的质量分数为1~100 mg/mL，所述EDC与NHS的组合物中EDC与NHS的质量比为1:（1~2）；活化反应的时间为至少30分钟；加入活化剂后，溶液中活化剂的质量分数为0.5~5%；

M2中，所述巯基化试剂与胶原类物质的质量比为0.2:1~10:1，所述氨基化试剂与胶原类物质的质量比为0.2:1~10:1；在接技改性反应过程中，采用盐酸和氢氧化钠溶液来调节反应液的pH值处于4~5的范围内；接技改性反应的时间为至少24小时；

M3中，所述还原剂与巯基化试剂的摩尔比为1:1，还原反应的时间为至少2小时；在还原反应过程中，采用盐酸和氢氧化钠溶液来调节反应液的pH值处于4~5的范围内；还原反应结束时采用氢氧化钠溶液调节pH值至8.0以上来终止反应；

M4中，所得第一组分于0℃~4℃保存；

M1至M3中，反应温度均为室温，室温指26℃±5℃。

4. 根据权利要求2所述的多重交联半月板修复用水凝胶的成套原料试剂，其特征是，P1中，所述多糖溶液中多糖的质量分数为10~200 mg/mL，所述高碘酸钠与多糖重复单元的摩尔比为0.25:1~1:1，反应时间为至少24小时；

P2中，所述阳离子交换树脂与反应液中多糖的质量比为10±5:1，反应时间为至少6小时；

P3中，采用绢丝过滤除去阳离子交换树脂；四丁基氢氧化铵与多糖重复单元的摩尔比为1:1~1:1.5，反应时间为至少6小时；醇沉时采用至少4倍反应液体积的乙醇，干燥时采用真空干燥箱且干燥时间至少48小时；

P4中，DMSO溶液中干燥后沉淀的质量分数为10~50 mg/mL，琥珀酰亚胺磷酸二苯酯与多糖重复单元的摩尔比为0.4:1~1:1，反应时间为至少2小时；正己烷的加入体积为反应液体积的至少3倍，洗涤所用丙酮的总体积为反应液体积的至少2倍，洗涤次数为至少3次；干燥时采用真空干燥箱且干燥时间至少48小时；所得第二组分于0℃~4℃保存；

所述多糖重复单元的摩尔量=多糖的质量÷多糖重复单元的分子量；P1至P4中，反应温度均为室温，室温指26℃±5℃。