[发明专利]一种用于人乳头瘤病毒分型检测的试剂盒

权利要求书

1.检测16，18，52，58型HPV和人actb基因的引物及探针在制备一种基于数字PCR检测技术用于人乳头瘤病毒分型检测的试剂盒中的应用，其特征在于，所述试剂盒包括引物探针预混液；所述引物探针预混液包括检测16，18，52，58型HPV的上下游引物、分别检测16，18，52，58型HPV的荧光探针、检测人actb基因的上下游引物和检测人actb基因的荧光探针；

所述检测16，18，52，58型HPV的上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示：5’-GGTGTTGGYVTWAGTGGBCATC-3’；

下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO:2 所示：

5’-TRTCTRTRGATTAYAARCARAC-3’；

所述检测16，18，52，58型HPV的荧光探针如下核苷酸序列：

检测HPV16型的荧光探针的序列如SEQ ID NO:3所示：

5’-TAGTGCTTATGCAGC-3’；

检测HPV18型的荧光探针的序列如SEQ ID NO :4所示：

5’-GTTTCTGAGGACGTT-3’；

检测HPV52型的荧光探针的序列如SEQ ID NO :5所示：

5’-TGGTAAACCTGGTATA-3’；

检测HPV58型的荧光探针的序列如SEQ ID NO:6所示：

5’-CGCACAGCCAGGGTCT-3’；

所述检测人actb基因的上游引物序列如SEQ ID NO:7所示：

5’-CTAGCTGGCCCGATTTCTCC-3’；

所述检测人actb基因的下游引物序列如SEQ ID NO:8所示：

5’-CGCCCAATACGACCAAATCAGA-3’；

所述检测人actb基因的荧光探针序列如SEQ ID NO:9 所示：

5’-TCCGGGTGATGCTTTTCCTAGA-3’；

所述试剂盒还包括反应预混液；所述反应预混液中含有dNTP、MgCl₂、BSA、

Tris-HCl缓冲液、热启动taq酶、尿嘧啶-DNA-糖基酶UDG和单分子扩增增强剂；

所述单分子扩增增强剂为Triton X-100和热稳定焦磷酸酶；所述试剂盒能够有效分辨终浓度低至1copy/μL的标准品。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂盒还包括水、阳性质控品和阴性质控品，所述阳性质控品为含有HPV16、18、52、58型目的片段的线性化质粒组合，其中每种目的片段的浓度均为105copies/μL，外加浓度为10ng/μL的人正常宫颈上皮细胞系DNA的水溶液；所述阴性质控品为浓度为100ng/μL的人正常宫颈上皮细胞系DNA的水溶液。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测16，18，52，58型HPV的荧光探针的两端分别设置荧光基团和淬灭基团，所述16，18，52，58型HPV的荧光探针的荧光基团依次为FAM，CY3，CY5和HEX；所述16，18，52，58型HPV的的荧光探针的淬灭基团依次为BHQ-1，BHQ-2，BHQ-3和BHQ-1。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测人actb基因的荧光探针以TexasRed为荧光基团，BHQ-2为淬灭基团。