[发明专利]一种空间转录组测序方法

权利要求书

1.一种空间转录组测序方法，其特征在于，步骤如下：

（1）编码微球的设计；

（2）微球位置信息的解码；

（3）组织切片处理及信使RNA的捕获；

（4）下游测序和分析定位。

2.根据权利要求1所述的一种空间转录组测序方法，其特征在于：所述步骤（1）的设计步骤如下：将微球上连接核苷酸序列。

3.根据权利要求2所述的一种空间转录组测序方法，其特征在于：每个微球上连接有1条至1000万条核苷酸序列。

4.根据权利要求3所述的一种空间转录组测序方法，其特征在于，所述核苷酸序列的序列信息包括：切割位点序列、扩增和测序接头序列、空间位置编码序列、分子标签序列和mRNA捕获探针序列。

5.根据权利要求2所述的一种空间转录组测序方法，其特征在于：所述微球由聚苯乙烯、二氧化硅制备而成的。

6.根据权利要求2所述的一种空间转录组测序方法，其特征在于：所述微球的粒径大小为0.1微米至100微米。

7.根据权利要求1所述的一种空间转录组测序方法，其特征在于，所述步骤（2）中微球位置信息的解码的步骤如下：

1）在微球装载到半导体测序芯片上，每个微球分别落入到芯片上的微孔内，并且每个微孔在芯片上的位置信息是已知的，随后通过上机测序，测得芯片上每个微孔内微球上所连接的空间位置编码序列；

2）在取得微球中编码序列与微孔的对应关系后，微球上的捕获序列原位捕获组织中mRNA，再经逆转录合成cDNA序列，建立组织切片中转录组的空间位置信息；

3）在完成捕获mRNA和逆转录合成cDNA过程后，微球上的核酸序列通过酶切释放并收集到离心管内，再经过文库构建和测序步骤后，即可获得微球上每条核苷酸链的序列信息。