[发明专利]一种斑蝥粉中斑蝥素的含量检测方法

说明书

本发明涉及一种斑蝥粉中斑蝥素的含量检测方法，包括如下步骤：（1）向斑蝥粉中加入0.1～0.5mol/L的盐酸溶液浸渍，斑蝥粉与盐酸溶液的质量体积（g：ml）比为1:15～25；（2）取步骤（1）的浸渍溶液加入至2倍～4倍体积的氯仿中振摇，得氯仿斑蝥提取液混合物；（3）将步骤（2）中氯仿斑蝥提取液混合物倒入电离萃取装置中，将电离萃取装置上下两极施加30～80V/cm的电压，静置20～60min，回收下层氯仿层；萃取3次；（4）合并步骤（3）的氯仿溶液，旋转蒸发至干燥，残渣加甲醇溶解，并转移至容量瓶中，摇匀，滤过；所述残渣为斑蝥素。本发明通过利用有机溶剂萃取斑蝥粉中的有效成分，并采用电离萃取提高萃取效率，保证斑蝥粉中斑蝥素含量测定结果稳定可靠。

技术领域

本发明属于质量检测领域，特别涉及一种斑蝥粉中斑蝥素的含量检测方法。

背景技术

斑蝥是经过干燥处理的芫青科昆虫南方大斑蝥Mylabris phalerata Pallas或黄黑小斑蝥Mylabris cichorii Linnaeus的虫体，是我国中医临床常用一种动物药，其功效为破血逐瘀，散结消瘸，攻毒蚀疮。现代药理学研究表明，斑蝥中重要的活性成分斑蝥素具有抗肿瘤、抗病毒的药理作用。天然的斑蝥素存在较强的毒副作用，且其在水中的溶解度也较低，口服生物利用度不佳。斑蝥粉是从斑蝥素提取液进一步提取得到的粉末状物质，其中主要成份为斑蝥酸钠，斑蝥酸钠相较于斑蝥素毒性大大降低，水溶性提高，在临床上有广阔的前景。

对于斑蝥素本身来说，关于其含量的测定，已报道的有重量法、酸碱法、紫外分光光度法、高效液相色谱法、气相色谱法等（胡朝阳.斑蝥素含量测定方法研究进展[J].广州化工,2011,39(10):49-51.），目前为止，一般以气相色谱法作为测定斑蝥素含量的主要途径。但对于斑蝥粉中有效成分含量测定方法及标准，尚未有相关的文献参考。申请人在前期实践中发现在检测斑蝥粉中有效成分含量时，采用普通的萃取方式会形成大量乳化层，斑蝥素不能有效提取，影响有效成分最终的含量测定结果。因此需要一种更合适的斑蝥粉有效成分含量检测方法，为斑蝥粉的质量标准制定奠定基础。

发明内容

为解决斑蝥粉中斑蝥素含量测定过程中，普通的萃取方式会形成大量乳化层，斑蝥素不能有效提取，影响有效成分最终的含量测定结果准确性的问题，本发明通过利用有机溶剂萃取斑蝥粉中的有效成分，并采用电离萃取提高萃取效率，进而保证斑蝥粉中斑蝥素含量测定结果稳定可靠。

本发明采用以下技术方案：

一种斑蝥粉中斑蝥素的含量检测方法，包括如下步骤：

步骤1：向斑蝥粉中加入0.1～0.5mol/L的盐酸溶液浸渍，斑蝥粉与盐酸溶液的质量体积（g：ml）比为1:15～25。不同pH斑蝥粉溶液，在pH值为2～7溶液中仅含斑蝥素，当pH值≥8时溶液中出现了斑蝥酸，且斑蝥素的含量下降，随着溶液pH的增加，斑蝥酸的含量增加与斑蝥素的含量下降更加明显，在pH≥8的溶液，斑蝥素与斑蝥酸量之和为加入的斑蝥素量。采用0.1～0.5mol/L的盐酸可以使斑蝥粉溶液的pH值下降到2～4，有利于斑蝥素的转化。

步骤2：取步骤1的浸渍溶液加入至2倍～4倍体积的氯仿中振摇，得氯仿斑蝥提取液混合物；斑蝥素为六氢-3a,7a-二甲基-4,7-环氧异苯并呋喃-1,3-二酮，难溶于水，易溶于丙酮、氯仿、乙醚及醋酸乙酯。

步骤3：将步骤2中氯仿斑蝥提取液混合物倒入电离萃取装置中，将电离萃取装置上下两极施加30～80V/cm的电压，静置20～60min，回收下层氯仿层；萃取3次；电离萃取装置的上电极为负电极、下电极为正电极。

电压过低时在1小时内观察不到分离效果，或分离速度十分缓慢。

步骤4：合并步骤3的氯仿溶液，旋转蒸发至干燥，残渣加甲醇溶解，并转移至容量瓶中，摇匀，滤过；所述残渣为斑蝥素。