[发明专利]一种检测乳杆菌在胃肠道内定殖以及分布情况的方法

说明书

本发明公开了一种检测乳杆菌在胃肠道内定殖以及分布情况的方法，属于生物技术领域。本发明提供了一种以绿色荧光蛋白基因作为标记基因的检测乳杆菌在胃肠道内定殖以及分布情况的方法，此方法利用绿色荧光蛋白对植物乳杆菌进行标记，通过追踪绿色荧光蛋白从而实现对植物乳杆菌的胃肠道示踪，检测方便，易于判别，具有准确度高以及检测效率高的优势。本发明提供了一种以氯霉素抗性基因作为标记基因的检测乳杆菌在胃肠道内定殖以及分布情况的方法，此方法利用氯霉素抗性基因对植物乳杆菌进行标记，通过追踪氯霉素抗性基因从而实现对植物乳杆菌的胃肠道示踪，检测方便，易于判别，具有准确度高以及检测效率高的优势。

技术领域

本发明涉及一种检测乳杆菌在胃肠道内定殖以及分布情况的方法，属于生物技术领域。

背景技术

植物乳杆菌是乳酸菌的一种，广泛分布在动物肠道中。植物乳杆菌可以通过代谢产生有机酸、过氧化氢、双乙酞、细菌素等多种天然的抑菌物质来抑制致病菌的生长繁殖，具有提高机体免疫力，维持肠道内菌群平衡，促进营养物质吸收，降低胆固醇水平，缓解乳糖不耐症及抑制肿瘤细胞的形成等多种功能。这些作用发挥的前提条件是必须能粘附到黏膜的表面或者相关部位，进行生长和繁殖。因此，研究植物乳杆菌在胃肠道的定殖和分布情况，对于评价其益生功能具有非常重要的作用。

目前，常见的用于研究植物乳杆菌在胃肠道中定殖和分布情况的方法主要分为依赖培养过程的方法和不依赖培养过程的方法两种。其中，依赖培养过程的方法普遍为采用YN-6、PSM、BSI、BIM-25和Beerens培养基等含有选择性试剂的选择培养基对胃肠道中植物乳杆菌进行分离和计数。但是，由于选择性试剂并不能准确干扰到某一种菌，因此，这种方法存在准确度低，适用范围窄的缺陷，具有很大的局限性。

不依赖培养过程的方法主要有3种，分别为琼脂糖凝胶电泳法(具体可见参考文献：Kimura KA,Mccartney A,Mcconnell M,et al.Analysis of fecal populations ofBifidobacteria and Lactobacilli and investigation of the immunologicalresponses of their human hosts to the predominant strains[J].Applied andEnvironmental Microbiology,1997,63(9):3394-3398.)、实时荧光PCR图谱分析法(具体可见参考文献：Inglis G D,Kalischuk L D.Direct Quantification ofCampylobacterjejuni and Campylobacter lanienae in Feces of Cattle by Real-Time Quantitative PCR[J].Applied and Environmental Microbiology,2004,70(4):2296-2306.)以及变性梯度凝胶电泳技术(具体可见参考文献：Favier C F,Vaughan E E,Vos W M D,et al.Molecular monitoring of succession of bacterial communitiesin human neonates[J].Appl Environ Microbiol,2002,68(1):219-226.)和16SrDNA测序技术相结合的分子生物学法(具体可见参考文献：Harmsen H J M,Raangs G C,He T,etal.Extensive Set of 16S rRNA-Based Probes for Detection of Bacteria in HumanFeces[J].Applied and Environmental Microbiology,2002,68(6):2982-2990.)。但是，这3种方法中，琼脂糖凝胶电泳法和实时荧光PCR图谱分析法存在抗干扰能力差，无法在构成结构复杂的肠道菌群样品中准确测定植物乳杆菌的缺陷，变性梯度凝胶电泳技术和16SrDNA测序技术相结合的分子生物学法存在操作复杂、效率低、成本高、处理样品量少的缺陷；并且，这三种方法都存在无法区分死植物乳杆菌和活植物乳杆菌的缺陷。