[发明专利]一种伤痛宁胶囊中马兜铃酸Ⅰ的含量检测方法

说明书

本发明提供了一种伤痛宁胶囊中马兜铃酸Ⅰ含量的检测方法，采用SPE‑UPLC法对马兜铃酸Ⅰ含量进行检测，该方法利用固相萃取柱对伤痛宁胶囊中马兜铃酸Ⅰ进行纯化处理，纯化过程中绝对损失很小，所得供试品溶液中杂质成分少，检测结果中马兜铃酸Ⅰ出峰位置无干扰，在液相色谱中能有效的分离，且加样回收率高，相对偏差小，能够有效、简便、精准地对伤痛宁胶囊中毒性成分马兜铃酸Ⅰ进行检测，从而确保伤痛宁胶囊临床用药安全性和稳定性。

技术领域

本发明属于分析化学技术领域，具体涉及一种伤痛宁胶囊中马兜铃酸Ⅰ的含量检测方法。

背景技术

伤痛宁胶囊为天地恒一制药股份有限公司自主研发的独家剂型，被收录于新药转正标准第82册第193页，该产品由乳香、没药、甘松、延胡索（醋制）、细辛、香附、山柰、白芷8味中药精制而成，具有散瘀止痛的功效，临床上主要用于跌打损伤，闪腰挫气等。由于该方中含有细辛药材，根据现有研究资料表明，细辛药材中含有肾毒性成分马兜铃酸Ⅰ，长期服用会使肾脏间质性纤维化而导致肾衰竭，所以在含有马兜铃酸Ⅰ的中成药中，补充和制定马兜铃酸Ⅰ的限量检查，控制中药制剂的质量，保证临床用药的安全性具有重要的意义。但由于中药成方制剂处方复杂，干扰大，且马兜铃酸Ⅰ含量甚微，因此，样品的纯化处理是关键。

目前，固体制剂中马兜铃酸Ⅰ的提取方法常采用的是：甲醇提取、提取液蒸干、碱水溶解、用氯仿提取去杂质、再将碱水酸化、用氯仿提取。但该方法提取过程中绝对量损失较大，实验结果偏差往往较大。

中国专利CN200910246586.9细辛药材和消肿止痛酊中马兜铃酸A的质量控制方法，公开了采用三氯甲烷对细辛药材和消肿止痛酊萃取纯化马兜铃酸Ⅰ的方法。

陈娜娜等（SPE-HPLC法测定辛芩胶囊中马兜铃酸Ⅰ的含量，中医研究，2014年第1期第17卷，72-74）报道了采用固相萃取法对辛芩胶囊中马兜铃酸Ⅰ进行提取，制备供试品溶液，采用等度洗脱，对马兜铃酸Ⅰ的含量进行了测定。

目前现有技术中未见报道伤痛宁胶囊中马兜铃酸Ⅰ的含量检测方法，因此有必要提供一种伤痛宁胶囊中马兜铃酸Ⅰ的含量检测方法，有效的控制伤痛宁胶囊的质量，确保临床用药的安全性和稳定性。

发明内容

鉴于此，本发明的目的在于提供一种伤痛宁胶囊中马兜铃酸Ⅰ的含量检测方法，该方法能快速便捷的分离并检测伤痛宁胶囊中马兜铃酸Ⅰ，从而有效的控制伤痛宁胶囊产品的质量，且该方法测定结果相对量偏差小，回收率高。

本发明提供了一种伤痛宁胶囊中马兜铃酸Ⅰ含量的检测方法，采用SPE-UPLC法对马兜铃酸Ⅰ含量进行检测，所述检测方法包括将伤痛宁胶囊配制成供试品溶液，采用乙酸铵水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行梯度洗脱。

进一步，所述将伤痛宁胶囊配制成供试品溶液包括以下步骤：

步骤一：取伤痛宁胶囊约5.0g置50ml量瓶中，加适量稀释剂后，超声，放冷，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，取出适量进行离心操作，上清液滤过，精密量取续滤液5.0ml和纯化水5.0ml混合均匀；

步骤二：固相萃取柱的活化：依次用甲醇、水、50%甲醇各5ml进行预洗；

步骤三：将步骤一中得到的混合均匀溶液加至固相萃取柱上，依次用30%甲醇溶液、冰醋酸-水-甲醇体积比为5：25：70的溶液各10ml洗脱，弃去洗脱液，继用冰醋酸-甲醇体积比为50:50的溶液10ml洗脱，收集洗脱液；

步骤四：将步骤三中的收集的洗脱液，水浴挥干溶剂，残渣用甲醇转移至5ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

进一步，所述固相萃取柱为以混合型强阴离子交换反相吸附剂为填充剂的固相萃取柱。

进一步，所述流动相A乙酸铵水溶液的浓度为10mmol/L，所述流动相A的pH控制在3- 7.5。