[发明专利]一种预示和鉴定公鸡繁殖能力的分子标记方法

说明书

本发明公开了一种预示和鉴定公鸡繁殖能力的分子标记方法，属于分子标记方法技术领域。为了解决无法从表型上对公鸡繁殖能力进行筛选，本发明提供了一种预示和鉴定公鸡繁殖能力的分子标记方法，具体方案是根据鸡TCF21基因SNP位点g.1892AG上下游512bp序列设计引物，再根据所得引物进行鸡基因组DNA的PCR扩增，之后利用限制性内切酶对扩增产物进行酶切，再对酶切产物进行电泳分离，获得公鸡睾丸性状标记基因型，所述公鸡睾丸性状是指公鸡睾丸重和睾丸比率。本发明所提供的方法具有操作简单、费用低、精确度高的特点，可进行自动化检测，是一种有效的分子标记育种手段，可大幅加快鸡的育种进程。

技术领域

本发明具体涉及一种预示和鉴定公鸡繁殖能力的分子标记方法，属于分子标记方法技术领域。

背景技术

据相关研究报道，雄性鸟类6～7周龄已经具备了繁殖能力，鸡睾丸的大小受遗传因素控制，睾丸较小的公鸡通常繁殖能力较差。敲除雄性小鼠的TCF21基因，小鼠会出现性别反转。性别决定基因SRY能够正向调控TCF21基因，然后TCF21再通过调节同一家族的其它基因影响睾丸发育和睾丸支持细胞的分化。

有文献报道，肉鸡的生长速度与生理适应性状呈负相关，所以应用传统的表型选择同时提高生长速度和改善肉鸡生理适应性状比较困难，肉鸡大多数重要经济性状都属于数量性状，而数量性状不仅受许多微效基因调控，而且还有可能受到一个或几个主效基因控制，所以将分子遗传标记育种与传统表型选择相结合能极大提高育种效率，加快育种进展。近年来，随着分子遗传学的迅猛发展，遗传标记逐渐被应用于畜禽的标记辅助选择，此项技术可大大提高育种效率、缩短世代间隔。开展与肉鸡重要经济性状相关基因多态性的研究具有现实意义。

发明内容

为了解决无法从表型上对公鸡繁殖能力进行筛选，本发明提供了一种预示和鉴定公鸡繁殖能力的分子标记方法，所采取的技术方案如下：

1)根据鸡TCF21基因SNP位点g.1892AG上下游512bp序列设计引物TCF21-F和TCF21-R，获得扩增引物；

2)提取鸡的基因组DNA；

3)利用步骤1)所得的扩增引物以步骤2)提取的DNA为模板，进行鸡基因组DNA的PCR扩增，获得扩增产物；

4)利用限制性内切酶BpuEI对步骤3)所得的扩增产物进行酶切，获得酶切产物；

5)利用琼脂糖凝胶对步骤4)所得的酶切产物进行电泳分离，根据电泳分离结果进行基因型判定，比较各基因型对应的公鸡睾丸性状，确定公鸡睾丸性状标记基因型，即完成预示和鉴定公鸡繁殖能力；

步骤1)中所述引物TCF21-F序列如SEQ ID No：1所示；所述引物TCF21-R如SEQ IDNo：2所示；

步骤5)中所述基因型判定标准：①电泳呈现一条带，大小为512bp，则鸡TCF21基因位点g.1892AG为A碱基，将其命名为AA基因型；②电泳呈现一条带，大小为460bp，则鸡TCF21基因位点g.1892AG为G碱基，将其命名为GG基因型；③电泳呈现两条带，大小分别为512bp和460bp，则该位点处于杂合状态，将其命名为AG基因型；所述公鸡睾丸性状是指公鸡睾丸重和睾丸比率，所述公鸡睾丸性状标记基因型为GG。

优选的，步骤3)所述的PCR扩增，是25μl反应体系，由下列成分组成：

PCR扩增条件为：94℃变性5min；94℃30sec，63.9℃30sec，72℃30sec，35个循环；72℃延伸10min。

优选的，步骤4)所述的酶切，是10μl反应体系，由下列成分组成：3～5U的内切酶，1μl的Buffer，0.3～0.5μg的PCR产物，添加去离子水至10μl；37℃反应3小时。

有益效果