[发明专利]一种促进红秆软脚铁皮石斛原球茎快速诱导的方法

说明书

本发明提供了一种促进红秆软脚铁皮石斛原球茎快速诱导的方法，涉及铁皮石斛原球茎的诱导方法，该方法将装有红秆软脚铁皮石斛茎段的培养瓶置于培养室中，通过1—2个月的培育，进行组培室控温、控光、湿度管理，使铁皮石斛原球茎快速诱导，提高铁皮石斛的产量。

技术领域

本发明涉及一种铁皮石斛原球茎的诱导方法，尤其是一种促进红秆软脚铁皮石斛原球茎快速诱导的方法。

背景技术

红秆软脚铁皮石斛又称黑节铁皮石斛，是由野生铁皮石斛培育出来的新品种，药效成分高，又容易加工成枫斗，从而引起人们的关注。目前，我国铁皮石斛工厂化生产主要依托组织培养对原球茎诱导、茎段丛生芽进行，对红秆软脚铁皮石斛原球茎诱导、再分化以及腋芽萌发和生根技术也有了相关报道（李丹，2010）。人们在进行离体培养时，激素的使用对铁皮石斛茎段诱导丛生芽较为迅速，一般只需20—45d。然而，铁皮石斛原球茎诱导费时较长，从原球茎成功诱导到茎段消亡，一般需要50—60d。这大大降低了铁皮石斛工厂生产效率。

因此，需要提供一种技术，促进铁皮石斛原球茎快速诱导，使铁皮石斛生产达到高效生产的目的，是亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种促进红秆软脚铁皮石斛原球茎快速诱导的方法，能够促进铁皮石斛原球茎快速诱导，提高铁皮石斛的产量。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案如下：一种促进红秆软脚铁皮石斛原球茎快速诱导的方法，准备好红秆软脚铁皮石斛茎段，开始诱导红秆软脚铁皮石斛原球茎，其步骤如下：

a)配置培养基： 1/2MS基本培养基、5.5g/L琼脂、0.55mg/L6-苄氨基腺嘌呤、0.55mg/L萘乙酸、0.1mg/L硝酸银、100g/L土豆泥、20g/L蔗糖、0.45g/L活性炭；

b）将上述培养基分别配置40L，装入深筒锅内，进行加温煮沸，充分混匀，pH5.5—5.7；

c）使用小型液体定量灌装机，将培养基装入培养瓶中，每瓶30g；

d）拧紧培养瓶，置于高压灭菌锅中灭菌45min，121℃，0.1MPa；

e）将灭菌的培养基置于室内冷却；

f）在超净工作台上，从无菌培养瓶中取出红秆软脚铁皮石斛，采用75%酒精消毒1min，清洗，沥干备用；

g）用75%酒精和酒精灯消毒刀片，用刀片将红秆软脚铁皮石斛茎秆切成茎段，茎段长度为2cm左右，去除茎段表皮；

h）将装好培养基的培养瓶置于超净工作台上，采用75%酒精灯消毒瓶盖和瓶口；

i）将红秆软脚铁皮石斛茎段置于消毒后的培养瓶中，继续采用75%酒精灯消毒瓶盖和瓶口，后拧紧瓶盖；

j）将装有红秆软脚铁皮石斛茎段的培养瓶置于培养室中30—45d即可，一直控制培养室温度为25±1℃，湿度为60%，光照为8h/d，光照强度为1800lx。

有益效果：

本发明所述的一种促进红秆软脚铁皮石斛原球茎快速诱导的方法，通过1—2个月的培育，进行组培室控温、控光、湿度管理，使铁皮石斛原球茎快速诱导，提高铁皮石斛的产量。

具体实施方式

为了使发明内容以及优点更加清楚明了，下面将结合具体实施例对本发明提供的一种促进红秆软脚铁皮石斛原球茎快速诱导的方法，予以实例详细说明：

1、材料与方法

本实验于2017年12月10日在湖北省、十堰市、郧阳经济开发区湖北金水源生物科技有限公司组培室进行。红秆软脚铁皮石斛茎段来源于湖北省“丹江口市盐池河中药材专业合作社”提供。