[发明专利]一种深加工植物油脂中转基因成分提取方法在审
| 申请号： | 201911018346.3 | 申请日： | 2019-10-24 |
| 公开（公告）号： | CN110656107A | 公开（公告）日： | 2020-01-07 |
| 发明（设计）人： | 张理博;鞠福龙;罗淑年;王雪;杨光;夏雷;赵平;刘园园 | 申请（专利权）人： | 九三集团哈尔滨惠康食品有限公司;黑龙江省质量监督检测研究院 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 23206 哈尔滨龙科专利代理有限公司 | 代理人： | 高媛 |
| 地址： | 150000 黑龙江省哈*** | 国省代码： | 黑龙;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 冷冻离心 上清液 植物油 植物油脂 转基因 预冷 沉淀 转基因成分检测 上清液收集 成分提取 三氯甲烷 食用油脂 晾干 混合液 灵敏度 深加工 异丙醇 异戊醇 正己烷 烘干 乙醇 裂解 洗涤 备用 溶解 保存 重复 观察 | ||
1.一种深加工植物油脂中转基因成分提取方法，其特征在于：所述方法步骤如下：
步骤一：准备一支2mL Eppendorf管，加入250μL正己烷和250μLDNA裂解液，再加入500μL转基因食用油脂，充分混合后放入水浴锅中裂解1h；
步骤二：裂解后向Eppendorf管中加入0.5mL预冷的三氯甲烷和异戊醇的混合液，充分混合后，冷冻离心，将上清液收集到一个新的2mL Eppendorf管中；
步骤三：重复步骤二一次后执行步骤四；
步骤四：向装有上清液的2mL Eppendorf管中加预冷的异丙醇，放置沉淀；
步骤五：沉淀后冷冻离心，弃去上清液，再加入乙醇进行洗涤，冷冻离心，弃去上清液，沉淀物在35℃烘箱中加热1h，如未完全晾干，继续复烘，每10min观察一次直至完全晾干；
步骤六：晾干后向Eppendorf管中加入TE缓冲液，充分溶解DNA，保存备用。
2.根据权利要求1所述的一种深加工植物油脂中转基因成分提取方法，其特征在于：步骤一中，所述DNA裂解液的制备方法为：称取4.00g～8.00g CTAB，16.00g～18.00gNaCl，4g～6g吐温-20，3g～5g Tris-HCl，1g～2g EDTA，1g～2g二硫苏糖醇，5μg～10μg蛋白酶K，用170mL～180mL水溶解后，调节pH为8.0，最终加水定容至200mL，在121℃温度、15psi压力下灭菌15min。
3.根据权利要求1所述的一种深加工植物油脂中转基因成分提取方法，其特征在于：步骤一中，所述水浴温度为60～80℃。
4.根据权利要求1所述的一种深加工植物油脂中转基因成分提取方法，其特征在于：步骤二中，所述三氯甲烷和异戊醇的混合液提前0～8℃预冷，三氯甲烷和异戊醇的体积比为15～30：1。
5.根据权利要求1所述的一种深加工植物油脂中转基因成分提取方法，其特征在于：步骤二中，所述冷冻温度为0～8℃，离心时间为10～30min，转速为12000～16000r/min。
6.根据权利要求1所述的一种深加工植物油脂中转基因成分提取方法，其特征在于：步骤四中，所述异丙醇为-10～-25℃预冷，添加量为500～1000μL。
7.根据权利要求1所述的一种深加工植物油脂中转基因成分提取方法，其特征在于：步骤四中，所述沉淀时间为1h，温度为-15～-24℃。
8.根据权利要求1所述的一种深加工植物油脂中转基因成分提取方法，其特征在于：步骤五中，所述冷冻离心条件为离心温度为0～8℃，离心时间为10～30min，转速为15000r/min。
9.根据权利要求1所述的一种深加工植物油脂中转基因成分提取方法，其特征在于：步骤五中，所述乙醇浓度为50～90vol.％，添加量为400～600μL。
10.根据权利要求1所述的一种深加工植物油脂中转基因成分提取方法，其特征在于：步骤六中，TE缓冲液添加量为15～60μL，溶解后DNA保存温度为0～8℃。
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