[发明专利]一种针对塔里木兔的个体识别方法

权利要求书

1.一种针对塔里木兔的个体识别方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(一)利用STR片段检测及多样性分析筛选出的12个可用于塔里木兔个体识别的STR位点及扩增这12个STR位点的引物序列如表1所示；

表1扩增塔里木兔STR位点所用引物序列

表2塔里木兔12个STR位点等位基因频率分布表

(二)检测样本DNA的提取：针对塔里木兔的不同状态的样本采用不同的取样方法；

(三)STR扩增：分别将需要进行个体识别的样本DNA作为模板DNA，选取表1中的各STR位点引物分别扩增各STR位点，得到STR扩增产物：

其中，PCR扩增体系配方为下述两种配方中的任意一种：

配方一：

配方二：

PCR扩增条件为：首先在98℃保温2min，然后进行30个保温循环，所述保温循环为在98℃保温10s、在60℃保温10s、在72℃保温10s，最后在72℃保温5min，保温结束后将样品置于4℃保存；

(四)扩增产物的毛细管电泳检测；

(五)同一认定的统计学计算：当两份样本在所检测的12个基因座的STR分型图谱完全一致时，需计算其个体识别的证据强度，即似然率；

(六)个体识别的认定：似然率大于或等于1×10¹²时可认定两份样本的同一性；若两份样本在所检测的12个基因座存在不一致的STR分型图谱，可排除两份样本的同一性；

所述个体识别的证据强度的计算方法为：

LR＝1/P(X)，

其中P(X)代表表型组合X的组合概率；

P(X)＝P1×P2×P3×…×Pi，

Pi为第i个基因座的表型频率，其中基因座的表型频率是根据上述表2中的12个STR位点等位基因频率进行确定。

2.根据权利要求1所述的塔里木兔的个体识别方法，其特征在于，步骤(二)中，肌肉组织剪取10mg～30mg置于EP管中，骨骼磨取20mg～30mg骨粉置EP管中，皮毛剪取皮部分或毛发的毛囊部分10mg～30mg置于EP管中、血痕剪取适量置EP管中；样本的基因组总DNA均用血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒提取，其中，骨骼、毛发组织消化时间延长为20～30h；用分光光度法检测样本DNA的纯度和浓度；将提取到的样本总DNA置于-20℃～-70℃保存，待后续试验用。

3.根据权利要求1所述的塔里木兔的个体识别方法，其特征在于，步骤(四)具体包括：

(1)将甲酰胺与毛细管电泳内标GS500liz按体积比130:1混合，配成mix；

(2)用国产96孔反应板分装mix，每个孔中加入10μl mix；

(3)对应着在96孔板中加入0.5μl STR扩增产物，离心到4000rpm即停；

(4)用金属浴加热器将混合板95℃加热预变性5min，拿出后立即放入-20℃环境中；

(5)冷却后拿出，4000rpm离心，解冻、混匀；

(6)上测序仪进行毛细管电泳分析；

(7)结果图谱用GeneMapper软件进行分析，得到塔里木兔STR分型图谱。