[发明专利]一种自闭症小鼠模型的构建方法

说明书

本发明提供一种自闭症小鼠模型，所述自闭症小鼠模型通过TALEN基因编辑方法敲除小鼠的Gabrb1基因的第一个外显子上的序列。本发明的Gabrb1‑/‑小鼠作为模型，可用于研究Gabrb1基因与自闭症疾病的关系，同时可用于Gabrb1基因与癫痫易发性的研究，通过对Gabrb1基因敲除小鼠进行行为学的筛查，进而研究该基因的缺失对自闭症疾病及癫痫易感性的影响，方法有效、易行。

技术领域

本发明涉及一种自闭症小鼠模型的构建方法，属于医疗检测技术领域。

背景技术

儿童自闭症又称为孤独症，最早由美国的卡勒(Kanner.L)教授于1943年提出，以后世界各国相继报道。自闭症患儿给家庭带来了巨大的痛苦和不幸。自闭症被认为是一种复杂的神经发育疾病，尽管目前对其病因有各种各样的假说，但其确切的发病原因尚不明确。近年来，随着自闭症关注度的逐渐升高，动物模型已成为国内外研究者研究自闭症发病机制和临床特征的重要手段和工具。因此建立和选择一种成功的自闭症模型是破解神经系统与自闭症疾病关系的重要手段。

GABRB1编码GABA-A受体的β1亚基，其涉及抑制性神经突触中氯离子的转运。构建GABA门控离子通道的最低要求是包含α和β亚基。最常见的GABA-A受体是包含两个α亚基，两个β亚基和一个γ亚基的五聚体。据报道GABRB1突变可以导致自闭症疾病易感性的增加，并且在自闭症患者脑中发现GABRB1蛋白减少。在癫痫患者脑中出现海马区GABRB1亚型的表达水平改变，GABRB1基因的F246S突变发生在癫痫性脑病患儿中。这些研究表明GABRB1基因是自闭症谱系疾病和癫痫易感性的疾病候选基因。此外，有研究发现，GABRB1的单核苷酸多态性(SNP)rs7435958与丘脑体积和智力有着较强的相关性。

然而，如今在基因敲除小鼠库中尚未发现有Gabrb1基因敲除小鼠，在国内外尚无对Gabrb1基因与自闭症及癫痫疾病的相关研究。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种自闭症小鼠模型以及构建方法。本发明Gabrb1-/-模式动物的构建采用了TALEN(转录激活因子样效应核酸酶)基因敲除小鼠技术，因为C57BL/6小鼠具有行为学的稳定性，常用来作为研究自闭症的小鼠品系，所以我们选择了在C57BL/6品系小鼠中敲除Gabrb1基因。Gabrb1基因位于小鼠5号染色体上(GenBank编号：NM_008069.4；Ensembl编号:ENSMUSG00000029212)，共有11个外显子，我们选用第一个外显子作为TALEN敲除靶点。将体外转录产生的TALEN mRNAs注射到受精卵中用于Gabrb1敲除鼠的产生。

本发明的第一个目的在于提供一种自闭症小鼠模型，所述自闭症小鼠模型通过TALEN基因编辑方法敲除小鼠的Gabrb1基因。

进一步地，所述敲除小鼠的Gabrb1基因，具体的是敲除Gabrb1基因的第一个外显子上的序列。

进一步地，所述敲除Gabrb1基因的第一个外显子上的5个碱基，所述Gabrb1基因的第一个外显子上的5个碱基序列为5’-gttgc-3’(SEQ ID NO:1)。

进一步地，敲除Gabrb1基因的第一个外显子上的序列后，其第一个外显子的核苷酸序列为5’-tttggggcttctctcttttcccgtgatgtatggtttgttgtgcacacaggtgagctgcctg-3’(SEQ ID NO:2)。

进一步地，所述小鼠为C57BL/6小鼠。

本发明的第二个目的在于提供上述自闭症小鼠模型的构建方法，所述方法采用以下方法实现：

(1)选用Gabrb1基因的第一个外显子作为TALEN敲除靶点，将体外转录产生的TALEN mRNAs注射到小鼠受精卵中；

(2)通过PCR鉴定方法对初代小鼠(F0)进行目的基因的扩增，然后进行DNA测序分析基因型；