[发明专利]产褐藻胶裂解酶的黄杆菌及其应用

说明书

本发明提供一种产褐藻胶裂解酶的黄杆菌及其应用。所述的黄杆菌B2，保藏编号为CGMCC No.17354。该黄杆菌B2的菌落颜色为黄色，菌落相连，不形成芽孢，不运动，革兰氏阴性菌。所述的黄杆菌是从腐烂的海带中筛选到的，用于产褐藻胶裂解酶，褐藻胶裂解酶的酶活力达到53 U/mL，该酶能够降解褐藻胶，其降解产物为褐藻寡糖，该降解菌的发现对褐藻胶裂解酶及后期褐藻寡糖的制备具有一定的商业价值。

技术领域

本发明属于微生物发酵领域，具体涉及产褐藻胶裂解酶的黄杆菌及其应用。

背景技术

褐藻寡糖是褐藻胶经降解得到的寡聚物，由古罗糖醛酸（G）和甘露糖醛酸（M）组成。由于褐藻寡糖具有多种生理活性，如：抗菌、抗氧化、抗肿瘤、抗衰老及促进植物生长的作用，近年来被越来越广泛的应用于食品、医药和农业等领域，具有巨大的经济价值与应用前景。

目前褐藻寡糖的制备方法通常由酸降解法，酶降解法，氧化降解法。酸降解法是较为常用的方法，其降解产物能维持褐藻胶的自身结构特征，不会产生酶解生成的不饱和双键和氧化降解产物的羧基。氧化降解制备的褐藻寡糖，其还原端1位的醛基易被氧化为羧基，而导致环的破裂。酶作为高效的生物催化剂，其在医药、食品、农业等各个领域内被广泛使用。生物酶法因其操作简便、反应温和、环境污染小等优点被广泛应用于寡糖制备。近年来，已有研究报道有多种微生物能发酵生产褐藻胶裂解酶，如：产微球茎菌（Microbulbifer）、假交替单胞菌（Pseudoalteromonas）、芽孢杆菌(Bacillus)、弧菌（Vibrio）等。目前大部分菌株产褐藻胶裂解酶的活力低，发酵周期长，从而无法使褐藻胶裂解酶菌株应用到实际发酵生产中。本发明提供一种产褐藻胶裂解酶的黄杆菌，该菌株发酵生产的褐藻胶裂解酶，酶活力高达53U/mL，发酵效率高，为褐藻寡糖的制备奠定了一定的基础。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一株产褐藻胶裂解酶的黄杆菌及其应用。本发明产褐藻胶裂解酶的黄杆菌，产酶量大，发酵效率高，在褐藻寡糖的制备中应用潜力大。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的目的之一在于提供了一株产褐藻胶裂解酶的黄杆菌，该菌株黄杆菌B2的分类命名为： Zobellia sp. B2，该菌株已于2019年03月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.17354。

上述黄杆菌B2在产褐藻胶裂解酶中的应用。

上述黄杆菌B2在产褐藻胶裂解酶中的应用，其黄杆菌产褐藻胶裂解酶的方法，包括以下步骤：

（1）黄杆菌B2菌液涂布到2216E固体平板培养基上，放置28℃生化培养箱中培养24h；

挑取平板上的黄杆菌进行三区划线，将三区划线后的平板放置28℃生化培养箱中培养24h；

挑取平板上的黄杆菌接种于装有2216E液体培养基的锥形瓶中进行培养，在28℃，转速为180rpm的摇床上培养12-16h至对数中后期，得到种子液；

（2）将步骤（1）制备的种子液接种于装有发酵培养基的锥形瓶中进行培养，在28℃，pH 7.2，转速为180rpm的摇床上培养36h，得到褐藻胶裂解酶发酵液。

上述步骤（1）中所述2216E固体平板培养基配方为：蛋白胨5g/L、酵母粉1g/L、六水合氯化铁0.0018g/L，氯化钠 26.5g/L、氯化钾0.9g/L、氯化钙1.03g/L、七水硫酸镁4.2g/L，琼脂20g/L；2216E固体平板培养基配方中不添加琼脂为2216E液体培养基。