[发明专利]一种D型肉毒毒素的微囊化制备方法

说明书

本发明属于生物农药技术领域，具体涉及一种D型肉毒毒素的微囊化制备方法。该方法包括以下步骤：S1，每100mL D型肉毒毒素溶液中加入1～5g的海藻糖，搅拌交联；S2，S1所得溶液中加入0.1～0.2g聚乙烯吡咯烷酮和明胶，静置8～18h后500～1000r/min搅拌45～90min；S3，S2所得溶液加入1～2g磷酸二氢钠，400～800r/min，搅拌15～45min；S4，S3制得的混合溶液在真空度0.025mPa、进风口温度90～100℃、出口温度60～80℃条件下喷雾干燥，干燥粉末即为D型肉毒毒素微囊。本发明的优点：(1)提高了D型肉毒毒素对外界环境的耐受性，降低了毒素的包装、储存和冷链运输的要求。(2)制备工艺简单，无复杂和极端条件，易于推广。(3)自然条件储存，时间长，毒力损失小。(4)本发明制备的D型肉毒毒素微囊更稳定。

技术领域

本发明属于生物农药技术领域，具体涉及一种D型肉毒毒素的微囊化制备方法。

背景技术

D型肉毒毒素是D型肉毒梭状芽孢杆菌(Clostridium botulinum)在厌氧条件下发酵产生的蛋白质类神经毒素，因为鼠类对其敏感，作为一种生物灭鼠剂用于草地鼠害治理，作为是一种安全、高效、经济的生物灭鼠剂，其优点具有易降解、无残留、不污染环境、不伤害鼠类天敌。作为生物灭鼠剂，灭鼠效果在90%以上，在草原鼠害防治和生态环境保护中发挥着不可替代的作用。

由于D型肉毒毒素的大分子蛋白神经毒素，在常温条件下，D肉毒毒素的生物活性与其空间形态结构相关，特别是在外界不利环境下，很容易发生肉毒毒素变性。其易受温度、光照、pH值、紫外线照射及动物胃肠道环境等因素的影响，致使具有灭鼠效果的毒性成分降解，甚至失去毒性。因此对储运条件的要求较高，需低温冷冻保存及运输，无形中增加了毒素的生产成本，限制了毒素的使用季节和使用地域。

现已报到的D型肉毒毒素灭鼠剂主要有水剂、冻干剂和颗粒剂，其中水剂需要常年在-16℃的低温冷库中保存，冻干剂虽然具有常温保存的特点，但是其制作过程相当繁琐，且需要具备大型的冻干设备才能完成，耗时耗力。颗粒剂本身在加工制作工程中就存在大量的D型肉毒毒素由于产热而损失的弊端，毒素使用量是常规量的10倍，室温保存期2个月。

CN107540732A公开了一种D型肉毒毒素的仿生矿化加工方法，加工方法包括用甲基纤维素溶液、羧甲基纤维素钠溶液、含蔗糖的明胶溶液的混合物对D型肉毒毒素蛋白进行保护，得到的D型肉毒毒素核液经海藻酸钙保护壳膜包被，最后经精蛋白/氧化硅杂化壳壁包被，得到仿生矿化加工的D型肉毒毒素颗粒。该方法辅料使用多，工艺复杂，制备的D型肉毒毒素仿生微囊颗粒虽然较水剂提升了D型肉毒毒素对温度的耐受性，降低了D型肉毒毒素储藏要求，经仿生矿化后的D型肉毒毒素矿化颗粒在室温下放置3个月毒力不变，半衰期5-6个月。

发明内容

本发明成功的克服了现有技术的缺陷，提供了一种即克服D型肉毒毒素冷冻储存的缺陷，又提高毒素对外界环境的耐受性和产品的稳定性，延长室温储运有效期的方法，实现了D型肉毒毒素室温保存2年，毒素毒力下降＜10%。

本发明采用的技术方案为：

一种D型肉毒毒素的微囊化制备方法，包括以下步骤：

S1，每100mL D型肉毒毒素溶液中加入1~5g的海藻糖，搅拌交联；

S2，S1所得溶液中加入0.1~0.2g聚乙烯吡咯烷酮和0.1~0.2g明胶，静置8~18h后500~1000r/min搅拌45~90min；

S3，S2所得溶液加入1~2g磷酸二氢钠，400~800r/min，搅拌15~45min；

S4，S3制得的混合溶液在真空度0.025mPa、进风口温度90~100℃、出口温度60~80℃条件下喷雾干燥，干燥粉末即为D型肉毒毒素微囊。

进一步的，所述的S1步骤中D型肉毒毒素溶液的毒价为2000万MLD/mL。