[发明专利]抗F4/80的多克隆抗体及制备方法

说明书

本发明属于生物技术领域，本发明公开了一种抗F4/80的多克隆抗体及制备方法，其中制备方法为：所述的抗F4/80的多克隆抗体通过F4/80蛋白片段作为抗原免疫获得。本发明的多克隆抗体对巨噬细胞具有显著的免疫荧光染色性能。

技术领域

本发明涉及属于生物技术领域，尤其涉及一种抗F4/80的多克隆抗体及制备方法。

背景技术

巨噬细胞是一种具有多种生理功能的免疫细胞，在感染应答、机体免疫、肿瘤、炎性反应等生理病理过程中均具有重要作用。巨噬细胞的这些重要生理作用，使其成为多种疾病治疗的重要靶点细胞，包括抗肿瘤、抗炎性、抗感染等多个方面。

特异的表面标志物是对巨噬细胞进行识别或靶向给药的基础。近年来，有关巨噬细胞表面标志的研究不断取得新的进展，许多在巨噬细胞表面表达的特殊蛋白及多糖类抗原被揭示，有望作为巨噬细胞的靶向标志物。其中，F4/80较受关注的巨噬细胞标志物之一。F4/80是巨噬细胞表面表达的一种特殊糖蛋白，其在肠、肺等部位巨噬细胞中均具有较高的表达。Laroui等[17]在肠炎小鼠模型中，利用F4/80抗体修饰的纳米颗粒携带核酸分子开展了肠巨噬细胞靶向性药物递送研究，显著提高了治疗效果，提示以F4/80作为受体分子在相关疾病的靶向干预研究中具有重要前景。

F4/80蛋白包含931个氨基酸(aa)，其中第645-931aa为7次跨膜和胞内序列，不能作为表面受体，1-644aa为胞外序列，也是一般抗体识别的序列。现有的抗F4/80抗体一般由特定的胞外序列片段作为抗原免疫动物制备。然而，由于F4/80胞外序列较长(644aa)，大多片段可能为无免疫活性的无效片段。以全长胞外序列进行动物免疫时，无免疫活性的片段可能对免疫活性片段产生屏蔽或干扰作用，影响抗体的产生；以较短的免疫活性片段进行动物免疫时，较短的抗原序列可能导致免疫刺激作用显著降低，甚至无法诱导抗体的产生。目前，商业化的抗F4/80抗体主要是以该蛋白的部分胞外序列为抗原免疫动物获得，最常用的是氮端50-150氨基酸序列或350-650氨基酸序列片段。现有的商业化抗体中，尽管免疫动物所用的蛋白片段仅有部分甚至少数氨基酸差异，但所获得抗体性能差异显著，表明F4/80蛋白片段的选择对其免疫原性及获得的抗体性能具有显著影响，明确F4/80优势免疫序列对于稳定获得高性能抗F4/80抗体具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种一种抗F4/80的多克隆抗体及制备方法。与商业化同类抗体相比，该多克隆抗体对巨噬细胞具有显著更强的免疫荧光染色性能。

本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：

本发明第一方面的实施例提供了一种抗F4/80的多克隆抗体的制备方法，所述的抗F4/80的多克隆抗体通过F4/80蛋白片段作为抗原免疫获得。

进一步的，所述的F4/80蛋白片段包含序列为F4/80蛋白第1至179氨基酸序列。

进一步的，所述的抗原的获得方法是将所述的F4/80蛋白片段与GST标签融合表达获得。

进一步的，所述的抗F4/80的多克隆抗体为免疫兔获得的抗兔多克隆抗体。

本发明第二方面的实施例提供了一种抗F4/80的多克隆抗体，所述的抗F4/80的多克隆抗体由上述的制备方法制备而得。

本发明的有益效果是所使用的F4/80氮端1-179aa多肽具有良好的免疫原性，是F4/80蛋白胞外序列中具有优势免疫表位的序列；使用该多肽作为抗原免疫兔子所获得的抗F4/80多克隆抗体较现有的利用其他氮端多肽获得的商业化同类兔多克隆抗体相比具有明显更好的亲和性能，免疫荧光染色巨噬细胞灵敏度高。

附图说明

图1为本发明一实施例中BioSun预测F4/80蛋白免疫表位分布情况；

图2为本发明一实施例中不同时间点血清抗体效价测定；