[发明专利]一种脱卤酶HadD14及其编码基因与应用

说明书

本发明公开了一种脱卤酶HadD14及其编码基因与应用。本发明提供了蛋白质，为)序列表中序列2所示的蛋白质。实验证明，采用本发明改造后的基因序列(序列1)经大肠杆菌原核表达能显著提高脱卤酶HadD14(序列2)的可溶表达量，且所得脱卤酶HadD14具有高活性，在不高于70℃的处理条件下具有热稳定性，在pH 5.0‑8.2的条件下具有pH稳定性，分别在不高于10％甲醇、10％乙醇、30％DMSO的处理条件下具有较强有机溶剂稳定性。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种脱卤酶HadD14及其编码基因与应用。

背景技术

卤代有机物在许多领域都有着广泛的应用。其中因在工业企业以及日用品中的大量使用，使它们成为重要的一类环境污染物。这些卤代有机物因其化学键十分稳定，多年来持续在生物圈中广泛引发环境问题。卤代有机物是使用和研究最多的一类有机物，其主要原因是由于它们相对简单的合成途径。但是由于卤代有机物的稳定性普遍较高，同时甚至对有可能降解它们的微生物具有毒性，使得长年来卤代有机物的生物可降解性很差。而过度与这些卤代污染物接触，会导致严重的环境和健康后果。在自然界中，分解这些污染物的生物降解能力是有限的，因此多年来，人类仍在受污染环境的修复和治理中投入大量的人力与财力。其中，微生物修复技术是卤代有机物造成的环境污染治理的主要手段。近年来，该技术的发展受到了科研工作者日益密切的关注。

微生物脱卤主要利用了菌株诱导生产并释放脱卤酶来实现。不同脱卤酶具有不同的特异性底物，包括氯代、溴代、碘代有机物以及不同的链长度，其中底物的偏好性取决于不同脱卤酶分别的催化机理。脱卤反应的主要催化机制为亲核取代，按照催化底物类型分类，可将脱卤酶分为卤酸脱卤酶(EC3.8.1.2，Haloacid dehalogenase，HAD)、卤代烷烃脱卤酶(EC3.8.1.5，Haloalkane dehalogenase，HLD)、4-氯苯甲酰-CoA脱卤酶、卤代丙烯酸脱卤酶等。其中最为常见的两类脱卤酶为卤酸脱卤酶与卤代烷烃脱卤酶，它们均为水解型脱卤酶。

脱卤酶不但在农药、化学战剂、PCDD/Fs等污染物降解中起到关键作用，还广泛应用于工业、畜牧业等多个领域。因此开发具有优良性质的新型脱卤酶具有重要应用价值和社会意义。

发明内容

为了开发具有优良性质的脱卤酶，本发明提供了如下技术方案：

本发明的一个目的是提供一种脱卤酶HldD14及其编码基因。

本发明提供了一种蛋白质，其为脱卤酶HldD14或其重组脱卤酶HldD14，具体如下(a1)-(a5)任一种：

(a1)序列表中序列2所示的蛋白质；

(a2)序列表中序列2第1-225位所示的蛋白质；

(a3)在(a2)所述蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白；

(a4)将(a1)-(a3)任一种经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有脱卤酶活性的蛋白质；

(a5)与(a1)-(a3)任一种具有98％以上同一性且具有脱卤酶活性的蛋白质。

标签具体如表1所示。

表1标签的序列