[发明专利]多肽、嵌合聚合酶及其应用

说明书

本发明公开了一种多肽、嵌合聚合酶及其应用。该多肽具有如SEQ ID No.3所示的氨基酸序列。该嵌合聚合酶包括：噬菌体DNA聚合酶；上述多肽；连接噬菌体DNA聚合酶和上述多肽的连接肽。野生型的DNA聚合酶对高浓度盐的耐受性较差，在高氯化钠或氯化钾环境中，其活性急剧降低，无法得到预期的延生产物，而本发明所提供的多肽可以有效提高DNA聚合酶的耐盐性，在通过连接肽将其连接到DNA聚合酶上形成嵌合DNA聚合酶后，聚合酶的耐盐性有了很大的提升，可以适用于较高盐浓度下的扩增。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，尤其是涉及一种多肽、嵌合聚合酶及其应用。

背景技术

目前，在医学、生物学、农学以及相关的一些领域，核酸扩增正成为一种普遍的检验中间手段。而在核酸扩增的诸多方法中，聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)是用于体外DNA扩增的最常用方法。在PCR过程中，通常利用寡核苷酸引物、DNA聚合酶以及特定的模板链等通过退火延伸来生成DNA双链产物，并借由提高和降低反应混合物的温度(即，热循环)使得DNA双链产物的两条链重新分开，充当下一轮退火和延伸的模板并不断重复从而实现扩增。

在过去的十几年间，已经开发出了不依赖于热循环的其它核酸扩增方法。这些方法因其循环过程无需依赖运行温度的变化而被称为是“等温扩增”。等温扩增作为PCR的有益补充，主要应用在微量的全基因组扩增和检测等方面。大多数的等温扩增过程中需要用到具有较强的链置换活性的DNA聚合酶，这些酶可以在复制的时候置换下游的DNA链从而不需要模板变性。Phi29 DNA聚合酶是等温扩增过程中的一种常用聚合酶，该聚合酶主要从枯草芽孢杆菌噬菌体Phi29中分离得到，具有良好的链置换能力和持续合成能力，目前已成为等温扩增的首选DNA聚合酶。但也应该看到，野生型Phi29 DNA聚合酶的两个缺陷：(1)耐盐性较差，在高氯化钠或氯化钾环境中，其活性急剧降低，难于适应在高盐体系中的应用；(2)底物DNA结合能力较差，需要提高反应体系中的酶量，来提高扩增产物。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种能够提高DNA聚合酶耐盐性的多肽、包含该多肽的嵌合聚合酶以及该嵌合聚合酶的应用。

本发明所采取的技术方案是：

本发明的第一方面，提供一种多肽，该多肽具有如SEQ ID No.3所示的氨基酸序列。

本发明实施例的有益效果是：

该多肽可以有效提高DNA聚合酶的耐盐性，在通过连接肽将其连接到DNA聚合酶上形成嵌合DNA聚合酶后，聚合酶的耐盐性有了很大的提升，可以适用于较高盐浓度下的扩增。

本发明的第二方面，提供一种嵌合聚合酶，包括：噬菌体DNA聚合酶；上述多肽；连接噬菌体DNA聚合酶和上述多肽的连接肽。其中，上述多肽为超嗜热甲烷菌(Methanopyruskandleri)拓扑异构酶V羧基端的E-L HhH模序，E-L HhH模序具有如SEQ ID No.3所示的氨基酸序列，或具有如SEQ ID No.4所示的核苷酸序列；

该嵌合聚合酶相比于现有的野生型的DNA聚合酶而言，耐盐性能有了很大的提升，可以适用于较高盐浓度下的扩增。

根据本发明的一些实施例，噬菌体DNA聚合酶为Phi29 DNA聚合酶。

根据本发明的一些实施例，Phi29 DNA聚合酶具有如SEQ ID No.1所示的氨基酸序列或具有如SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。

根据本发明的一些实施例，噬菌体DNA聚合酶通过羧基端与所述连接肽相连。