[发明专利]一种可识别及调节淋巴细胞的树舌酸性均一多糖制备方法

说明书

本发明涉及一种可识别及调节淋巴细胞的树舌酸性均一多糖制备方法,属于天然产物功能成分制备领域。所述的制备方法，以树舌灵芝发酵浸膏、水和乙醇为原料制备树舌灵芝发酵粗多糖及树舌灵芝发酵粗多糖溶液，向所述树舌灵芝发酵粗多糖溶液中加入氯仿与正丁醇的混合溶液，并进行浓缩干燥，得到树舌灵芝发酵除蛋白多糖，用离子交换柱层析方法进行生物大分子分离、纯化得到纯化后的树舌灵芝发酵除蛋白多糖溶液，洗脱、收集合并得到树舌灵芝发酵酸性多糖，再次洗脱并收集、冷冻，制得树舌酸性均一多糖。此方法可针对性的分离纯化得到具有特异性识别肠癌细胞的树舌灵芝发酵中性杂多糖，方法具有准确、简便、有效的特点。

技术领域

本发明涉及一种可识别及调节淋巴细胞的树舌酸性均一多糖制备方法，属于天然产物功能成分制备领域。

背景技术

树舌隶属于担子菌门，非褶菌目，灵芝菌科，灵芝属，是一种重要的药用菌物资源。树舌多糖是其主要的活性成分，具有增强机体免疫力、抗氧化等活性可用于治疗胃炎、肝炎、消化道癌症等疾病。树舌多糖作为生物大分子，其功能活性与其化学结构息息相关，而树舌多糖的化学结构又与其制备方法及评价方式关系密切。目前，树舌多糖的制备方法均将树舌多糖提取量达到最高为出发点，通过优化工艺条件，获得提取量最大的树舌多糖。但是，提取量的提升，常常会使提取的多糖中混入其他杂质，或者破坏多糖的活性结构，而使树舌多糖的活性功能受到影响。

发明内容

本发明是针对现有研究及技术的不足，旨在提供一种可识别及调节淋巴细胞的树舌酸性均一多糖制备方法。

本发明的技术方案为：一种可识别及调节淋巴细胞的树舌酸性均一多糖制备方法，其特征在于，包括：

步骤一、以树舌发酵浸膏、水和乙醇为原料制备树舌发酵粗多糖，并向所述树舌发酵粗多糖中加入水，配制成质量体积浓度5%的树舌发酵粗多糖溶液；

步骤二、向所述树舌发酵粗多糖溶液中加入氯仿与正丁醇的混合溶液，并进行浓缩干燥，得到树舌发酵除蛋白多糖；

步骤三、将所述树舌发酵除蛋白多糖制备成浓度为20g/L的树舌发酵除蛋白多糖溶液，并采用离子交换柱层析方法进行生物大分子分离、纯化得到电荷均一的树舌发酵除蛋白多糖溶液；

步骤四、依次以蒸馏水、0.1mol/L NaCl溶液、0.2mol/L NaCl溶液为洗脱剂，均以1mL/min的流速洗脱，对所述纯化后的树舌发酵除蛋白多糖溶液进行洗脱，收集以0.2mol/LNaCl溶液为洗脱液洗脱后的部分，每5分钟收集1管，总洗脱体积为V₁，检测收集的各管中液体成分，将具有糖含量的合并，冷冻干燥，得到树舌发酵酸性多糖；

其中，前两次洗脱后不进行分管收集；

步骤五、向所述树舌发酵酸性多糖中加入NaCl溶液，使树舌发酵酸性多糖完全溶解；

并利用凝胶柱层析进行树舌发酵酸性多糖的分子量均一化，获得树舌酸性均一多糖溶液；

其中，每10mg树舌发酵酸性多糖中加入2mL 的摩尔浓度为0.15mol/L 的NaCl溶液；

步骤六、以0.15mol/L NaCl溶液为洗脱液，以4mL/15min的洗脱流速，对所述树舌发酵酸性均一化多糖溶液进行洗脱，每4mL收集1管，总洗脱体积为V₂，合并第46～60管洗脱液，冷冻干燥后得到可识别并结合淋巴细胞的树舌酸性均一多糖。

所述树舌发酵浸膏的相对密度为1.4。

所述步骤一中树舌发酵粗多糖的制备过程为：

步骤1、将树舌发酵浸膏浸泡在94%～95%的乙醇溶液中得到树舌发酵浸膏溶解液；其中，浸泡温度为：3℃～6℃，浸泡时间为12～24小时；