[发明专利]一种双重敏感型聚合物-药物连接物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种双重敏感型聚合物-药物连接物，其特征在于，所述双重敏感型聚合物-药物连接物为谷胱甘肽还原敏感及组织蛋白酶B敏感的双重敏感型聚合物-药物连接物mPEG-Y-SS-R，

其中，mPEG规格为聚乙二醇单甲醚mPEG5000，Y为缬氨酸-瓜氨酸， R为带有羧基的药物化合物，构成双重敏感型聚合物-药物连接物mPEG-VC-SS-R，具有如(Ⅰ)所示的结构式：

（Ⅰ）

所述带有羧基的药物化合物选自藤黄酸、大黄酸、缬沙坦、甲氨蝶呤、醋酸艾塞那肽、IDN-6556、AGI-1067、偶氮丝氨酸、氯苯丙氨酸、N–乙酰–L–苯丙氨酸和N–乙酰–L–缬氨酸。

2.根据权利要求1所述的双重敏感型聚合物-药物连接物，其特征在于，所述带有羧基的药物化合物为藤黄酸，构成谷胱甘肽还原敏感及组织蛋白酶B敏感的双重敏感型聚合物-药物连接物mPEG-VC-SS-GA，具有如(Ⅲ)所示的结构式：

 (Ⅲ)。

3.权利要求1或2所述的双重敏感型聚合物-药物连接物的制备方法，其特征在于，制备方法包括如下步骤：1）将酶敏感底物与Fmoc连接制成酶敏感底物中间体；2）将带有羧基的药物化合物R与胱胺二盐酸盐制备成含二硫键的药物衍生物R-胱胺；3）将酶敏感底物中间体与含二硫键的药物衍生物R-胱胺连接制备成双重敏感的药物衍生物；4）将聚乙二醇单甲醚与双重敏感的药物衍生物缩合为谷胱甘肽还原敏感及组织蛋白酶B敏感的双重敏感型聚合物-药物连接物mPEG-Y-SS-R。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，制备方法包括如下步骤：

1）酶敏感底物中间体Fmoc-缬氨酸-瓜氨酸(Fmoc-Val-Cit)的合成：

1.1）将Fmoc-Val，HOSu，DCC在0°C下共溶于四氢呋喃中，搅拌24h后过滤，减压旋蒸，得白色固体产物Fmoc-Val-OSu；

1.2）将Cit 与NaHCO₃共溶于蒸馏水中，冷却至0℃，将Fmoc-Val-OSu的DME溶液逐滴加至Cit与NaHCO₃的混合溶液中，另加四氢呋喃助溶，室温搅拌24h，得反应液；

1.3）于步骤1.2）所得反应液中滴加饱和碳酸钾调节pH至8-9，然后以乙酸乙酯萃取，收集水层，加入柠檬酸溶液调节pH至3-4，析出白色凝胶状固体，过滤，将所得白色凝胶状固体溶于四氢呋喃与甲醇的混合溶液中，旋蒸浓缩后，加入甲基叔丁基醚，0 ℃搅拌过夜，过滤，真空干燥，得白色固体产物为酶敏感底物中间体Fmoc-缬氨酸-瓜氨酸(Fmoc-Val-Cit)；

2）含二硫键的药物衍生物R-胱胺(R-SS-NH₂)的合成：

2.1）将带有羧基的药物化合物R溶于二氯甲烷溶液中，冷却至0℃后，加入EDCI与HOBT，所得混合物在0℃下活化1h后，依次加入胱胺二盐酸盐的甲醇溶液和三乙胺，常温搅拌48h，得反应液；

2.2）将步骤2.1）所得反应液以NaHCO₃溶液洗涤，收集有机层，以无水硫酸镁进行干燥，过滤，柱层析分离，真空干燥，得含二硫键的药物衍生物R -胱胺(R-SS-NH₂)；

3）双重敏感的药物衍生物Fmoc-缬氨酸-瓜氨酸-R(Fmoc-VC-SS-R)的合成：

3.1）将步骤1）得到的Fmoc-Val-Cit溶于二氯甲烷与甲醇的混合溶液中，冷却到0 ℃，加入EDCI 和HOBT，所得混合物在0 ℃ 下活化1h后，加入步骤2）得到的R-SS-NH₂的二氯甲烷溶液和三乙胺，所得混合物搅拌过夜，反应结束后，减压浓缩，加入冰水，并在4℃保存过夜，过滤，水洗三次，真空干燥，以柱层析色谱进行纯化，得双重敏感的药物衍生物Fmoc-缬氨酸-瓜氨酸-R (Fmoc-VC-SS-R)；

4）双重敏感型聚合物-药物连接物mPEG-VC-SS-R的合成：

4.1）将丁二酸酐与DMAP溶于吡啶溶液中，然后滴加至mPEG的氯仿溶液中，所得混合物在60℃氮气保护下搅拌反应24h后，用生理盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥后，过滤取有机层，浓缩，以乙醚洗涤后，真空干燥，得白色固体产物mPEG-COOH；

4.2）将mPEG-COOH溶于二氯甲烷中，加入EDCI、HOBT和4 Å型分子筛，在0 °C黑暗中活化，得mPEG-COOH溶液；

4.3）取步骤3）所得Fmoc-VC-SS-R 溶于THF中，加入DBU搅拌10分钟，所得混合液加入到mPEG-COOH溶液中，室温氮气保护反应2天；

4.4）反应结束后，以蒸馏水洗涤，然后以氯仿萃取，合并有机层，减压蒸发，加入乙醚洗涤，然后过滤，所得固体真空干燥后加入超纯水，搅拌，过滤，透析2天，期间分别于2h、6h、12h、24h、36h更换释放介质共5次，冷冻干燥后，得目标产物双重敏感型聚合物-药物连接物mPEG-VC-SS-R。