[发明专利]定量检测多种β-内酰胺酶抑制剂残留的试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.定量检测多种β-内酰胺酶抑制剂残留的试剂盒，其特征在于，该试剂盒由β-内酰胺酶溶液、β-内酰胺酶抑制剂标准品溶液、显色储备液、缓冲液、96孔黑色避光酶标板组成，实现同时对液态奶样品中舒巴坦、克拉维酸、他唑巴坦和阿维巴坦4种β-内酰胺酶抑制剂的定量多残留检测；

其中，每毫升所述β-内酰胺酶溶液中含有1-10万单位β-内酰胺酶；

每毫升β-内酰胺酶抑制剂标准品溶液中含有2.0-50.0mg β-内酰胺酶抑制剂标准品；

每毫升底物显色储备液中含有5-20mg/mL头孢硝噻吩。

2.根据权利要求1所述的定量检测多种β-内酰胺酶抑制剂残留的试剂盒，其特征在于，所述β-内酰胺酶抑制剂标准品溶液中的β-内酰胺酶抑制剂为克拉维酸、舒巴坦、他唑巴坦、阿维巴坦中任一种。

3.根据权利要求1所述的定量检测多种β-内酰胺酶抑制剂残留的试剂盒，其特征在于，所述的β-内酰胺酶为超广谱β-内酰胺酶。

4.根据权利要求1所述的定量检测多种β-内酰胺酶抑制剂残留的试剂盒，其特征在于，所述的液态奶样品为纯牛奶或复原乳。

5.根据权利要求1所述的定量检测多种β-内酰胺酶抑制剂残留的试剂盒，其特征在于，在所述β-内酰胺酶溶液中，采用含有0-5%牛血清白蛋白、0-15%海藻糖、0-2%聚乙烯吡咯烷酮、0-5% proclin300的缓冲液作为稀释液。

6.根据权利要求1所述的定量检测多种β-内酰胺酶抑制剂残留的试剂盒，其特征在于，在β-内酰胺酶抑制剂标准品溶液中，采用含有0-2%聚乙烯吡咯烷酮的缓冲液作为稀释液。

7.根据权利要求1所述的定量检测多种β-内酰胺酶抑制剂残留的试剂盒，其特征在于，在底物显色储备液中，采用含有0-10% L-半胱氨酸、0-10%聚乙烯吡咯烷酮、0-10%甘油的二甲基亚砜作为稀释液。

8.根据权利要求1所述的定量检测多种β-内酰胺酶抑制剂残留的试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为0.1-1mol/L的磷酸盐缓冲溶液，pH为6-8。

9.一种使用权利要求1所述的试剂盒的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）工作溶液的配制

（1.1）将β-内酰胺酶抑制剂标准品溶液用缓冲液稀释至合适浓度的系列标准梯度溶液；

（1.2）将底物显色储备液用缓冲液稀释为0.5～2 mg/mL的底物显色工作液；

（2）样品前处理

液态奶样品处理方法：准确称取2.00 g液态奶样品于10 mL离心管中，加入2 mL已腈涡旋混匀，4000 r/min 离心5 min；取上清液转移至另一10 mL离心管中，加入3mL正己烷，剧烈涡旋1 min，4000 r/min 离心5 min，去除脂肪，重复两次，收集下层清液，于10 mL 离心管中；40℃氮气吹干；用2 mL PBS溶液超声复溶，过0.22μm的水相滤膜，得样品处理液；

（3）使用试剂盒进行检测

（3.1）将β-内酰胺酶溶液与β-内酰胺酶抑制剂标准梯度溶液或样品处理液混合，避光孵育；

（3.2）将（3.1）中混合溶液与底物显色工作液混合，避光孵育；

（3.3）于488nm处，测定（3.2）中反应后溶液体系的吸光值，记录结果；

（4）分析测试结果

以β-内酰胺酶抑制剂浓度的对数值作横坐标，吸光值作为纵坐标，绘制标准曲线；将待测样品的吸光值放入标准曲线的回归方程进行计算，得出待测样品中β-内酰胺酶抑制剂的残留量。