[发明专利]帕利亚姆血清群病毒群特异性与血清型特异性RT-PCR检测引物及试剂盒

说明书

本发明涉及帕利亚姆血清群病毒群特异性与血清型特异性RT‑PCR检测引物及试剂盒，该试剂盒包括4对引物，分别为PALV‑S7‑F和PALV‑S7‑R、CHUV‑S2‑F和CHUV‑S2‑R、BCV‑S2‑F和BCV‑S2‑R、DAV‑S2‑F和DAV‑S2‑R；还包括空白对照模板、阳性对照模板和PCR扩增试剂。采用本发明试剂盒可以进行PALV群特异性RT‑PCR检测，能够准确检测出样品中的PALV病毒；之后通过本发明试剂盒，进行PALV血清型特异性RT‑PCR检测，可对CHUV、BCV与DAV毒株的血清型进行判断；检测结果准确、可靠，为我国PALV的流行病学调查提高了强有力的技术支持。

技术领域

本发明属于兽医传染病检测技术领域，涉及一种帕利亚姆血清群病毒(Palyamsero group virus,PALV)的群特异性与血清型特异性RT-PCR检测引物及试剂盒。具体为针对Chuzan Virus(CHUV)、Bunyip Creek virus(BCV)和D’Aguilar Virus(DAV)三种病毒的群特异性与血清型特异性RT-PCR检测的检测引物及试剂盒。

背景技术

帕利亚姆血清群病毒(Palyam serogroup Virus,PALV)是一种由媒介昆虫库蠓(Culicoides spp.)传播的虫媒病毒，广泛分布于亚洲、非洲与澳大利亚的热带、亚热带与温带地区，主要感染牛羊等反刍动物。PALV具有多种血清型，由于历史原因，不同血清型的PALV往往以病毒首次分离地的地名进行命名，根据血清中和实验，目前分离出的PALV可分为6种血清群：Chuzan Virus(CHUV)、D’Aguilar Virus(DAV)、Bunyip Creek virus(BCV)、CSIRO Village virus、Marrakai Virus与Petevo virus，不同血清型病毒之间无明显的交叉保护性。目前在亚洲已发现CHUV、DAV与BCV的流行，而CSIRO Village virus、MarrakaiVirus与Petevo virus流行于澳大利亚与非洲。

PALV感染可引起妊娠动物的生产异常，表现为流产、死胎或脑组织发育不全的畸形胎。1985-1986年，日本妊娠母牛中爆发CHUV感染，导致大量的新生犊牛出现积水性无脑小脑发育不全综合症(Hydranencephaly cerebellar hypoplasia syndrome,HCH)，给日本养牛业带来了严重的经济损失。2007年韩国的一项家畜虫媒病毒毒血清学调查研究显示，发生流产牛的CHUV抗体阳性率为22.8％，认为CHUV可能与发生在本国牛上的流产有一定的关系。目前日本已经研发了针对CHUV的灭活疫苗，用于控制本病的流行。

PALV基因组大小约20kb，由10个节段的双链RNA组成(Seg-1～Seg-10)，可编码7种结构蛋白(VP1～VP7)和4种非结构蛋白(NS1、NS2、NS3与NS3a)。在进化上PALV与蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)，流行性出血病病毒(Epizootic haemorrhagic disease virus,EHDV)和非洲马瘟病毒(African horse sickness virus,AHSV)具有最近的亲缘关系。PALV的Seg-2编码的VP2蛋白构成病毒粒子的最外层衣壳，VP2蛋白介导病毒对细胞表面受体的特异吸附，参与病毒粒子从感染细胞中的释放，诱导PALV特异性中和抗体的产生，决定病毒的血清型。Seg2决定着PALV的血清型，在不同血清型PALV毒株之间具有高度变异的特性，是通过核酸检测方法确定PALV血清型唯一的靶序列。PALV的Seg-7编码的VP7蛋白构成病毒粒子内层衣壳，VP7蛋白为环状病毒属病毒的群特异性抗原，可诱导产生病毒的群特异性抗体，其核苷酸和氨基酸序列在不同血清型毒株之间高度保守，是进行PALV种属鉴定最为重要的候选靶序列。