[发明专利]一种具有辅助抗肿瘤作用的石莼寡糖复合物的制备方法

说明书

本发明公开了一种具有辅助抗肿瘤作用的石莼寡糖复合物的制备方法，其是从绿藻石莼中提取获得石莼多糖粉末，然后利用过氧化氢及抗坏血酸或异抗坏血酸氧化水解石莼多糖，经纯化后得到高纯度的石莼功能寡糖，再与同时制备的降解石莼活性多糖按比例调配成所述复合物。经动物药效学证实，所得复合物在KM小鼠体内对H22肝癌瘤具有显著的杀伤能力，且无明显副作用，是一种无毒性、副作用小、十分安全的生物活性物质，这不仅为石莼作为海洋药物资源的进一步利用提供了新的途径，也为治疗或预防肿瘤的药物开发提供了新的选择。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种具有辅助抗肿瘤作用的石莼寡糖复合物的制备方法。

背景技术

肿瘤作为一种恶性疾病，其致死率较高，患者也深受其附带病痛的困扰，并且其患病率正逐年上升，社会对于抗肿瘤药物的需求也逐年上涨。传统上用于抗肿瘤的药物常伴有各种各样的副作用，或者价格十分昂贵，因而目前市场对于高效、低副作用、低成本、适用性广的新型抗肿瘤药物具有相当大的需求。海藻中的天然高分子化合物如多糖等，具有一定的抗肿瘤作用，但由于多糖的不能直接吸收，存在不确定性，因此作为多糖降解物并且可以直接被人体吸收的寡糖成为了新的研究重点。

石莼又称海白菜、岩头青等，分布广泛，价格低廉，作为食品的应用已有较长历史，且在传统医药记载上具有利水消肿、软坚化痰、清热解毒之功效，虽有关于其药用的研究，但其深入挖掘及广度开发则相对滞后，与其同科属的浒苔则已有较为完善的研究，因此开发石莼的药用潜力是非常有必要的。同时，大量研究资料表明，寡糖具有抗肿瘤生物活性，因此系统地完成石莼寡糖制备及药理活性分析，开发出一种具有抗肿瘤活性且副作用小的石莼寡糖是相当有必要的。

但寡糖的规模化应用受限于寡糖制备技术研究的不足而难以大规模推广。寡糖的自由基氧化法制备是利用过氧化氢及抗坏血酸反应后产生大量自由基的氧化能力拆解多糖内部糖苷键。相比传统的酸法制备，该方法避免了使用强酸，具有操作方便、效率高、无污染的优点。而本法制备的石莼寡糖尚未见相关文献报道。

发明内容

本发明为解决现有技术的不足，提供了一种抗肿瘤活性强、不良反应低的石莼寡糖复合物的制备方法。

为实现以上目的，本发明采用如下技术方案：

一种具有辅助抗肿瘤作用的石莼寡糖复合物的制备方法包括以下步骤：

1）将石莼利用清水浸泡脱盐后干燥并粉碎，然后按20-30mL/g的量向所得石莼干粉中加入体积浓度为60%-80%的乙醇溶液，回流提取1-2小时，回流结束后烘干，得到干燥脱脂的石莼粉末，回收的乙醇可循环使用；

2）按30-40mL/g的量向步骤1）制得的石莼粉末中加入蒸馏水，并在60-70℃的萃取温度下以350-400W超声波辅助提取120分钟，而后于80-90℃热水中浸提2-3小时，提取结束后过滤，将滤渣按上述条件重复提取2-3次，合并滤液，4000-5000rpm离心10-20分钟，所得上清液在65-70℃下减压浓缩至原体积的1/10，再加入体积浓度为95%的乙醇使溶液中乙醇的体积浓度达80%，然后在4℃静置8-12小时，滤取沉淀，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，减压干燥，得石莼粗多糖；

3）将步骤2）制备得到的石莼粗多糖按体积比1:100-1:120完全溶解于蒸馏水中，然后加入溶液重量0.1%-0.2%的中性蛋白酶，于40℃下静置2-3小时后，于100℃煮沸20-30分钟，再于4000-5000rpm离心10-15分钟，除去沉淀，得到除去蛋白的粗制多糖溶液；

4）将步骤3）所得粗制多糖溶液经HPD-826大孔吸附树脂填充柱除杂后，按35-50mL洗脱液加入1g非极性吸附剂活性炭吸附去除色素，再以60-80rpm摇床震荡1-2小时，而后以6000-8000rpm离心20-30分钟，收集上清液；