[发明专利]一种梅鱼加工副产品的抗真菌肽的制备方法

说明书

本发明涉及生物技术提取领域，针对现有技术的抗真菌肽抗菌活性较低及抑菌种类有限的问题，公开了一种梅鱼加工副产品的抗真菌肽制备方法，包括以下步骤：（1）、预处理；（2）、酶解；（3）、过滤得澄清液；（4）、分离纯化；（5）、多肽分级；（6）、培养观察抑菌圈。本发明提供了一种梅鱼加工副产品的抗真菌肽制备方法，该抗真菌肽具有较高的抗菌活性，且是初次从梅鱼中提取抗真菌肽；该抗真菌肽是从梅鱼的加工副产品鱼头中进行提取，实现废物再利用，成本较低；丰富了抗真菌肽的种类，能更好的对食品进行保质保鲜，助于了解利用梅鱼副产物蛋白质水解后的抗真菌肽保存食物、防止腐败和病原微生物。

技术领域

本发明涉及生物技术提取领域，尤其是涉及一种梅鱼加工副产品的抗真菌肽的制备方法。

背景技术

食品安全是公共卫生领域的一个重要问题，随着我国居民生活水平的不断提高，人们对食品质量和安全的关注程度越来越高，而由微生物引起的食品腐败和食物中毒是食品安全的首要问题，尤其是含糖和淀粉高的食品容易受真菌污染，且在一定的条件下可产生有毒代谢产物—真菌毒素。

抗菌肽是小分子化合物，通常有10-50个氨基酸，抗菌肽来源非常广泛，昆虫、哺乳类、两栖类、细菌和真菌及植物体内都有发现；海洋动物生活于富含各种各样微生物的水环境中长期的生存适应使其形成了有效防御功能，抗菌肽已被认为鱼、虾、贝等防御系统的主要成分之一；这些肽可以通过酶促水解或者化学水解在体外产生，在食品工业中抗菌肽发挥着积极的作用，它可以抑制病原细菌和真菌在食品中的生长，抗真菌肽是抗菌肽中的一个子部分。

梅鱼是一种小型海洋鱼类，有重要的经济价值，这种鱼常被用来制作罐头制品，在加工过程中会产生大量的抗真菌肽。

专利号CN200910175405.8，专利名称为“一种抗真菌肽及其制备方法和应用”，本发明提供了一种抗真菌肽，是从苦荞种子水溶性提取物中纯化得到的，分子量为3.909kDa的多肽。该抗真菌肽的制备方法是取苦荞种子粉碎，脱脂，使用缓冲液抽提，经抽提获得粗蛋白后，经过热处理，蛋白质层析分离即Resource S阳离子交换和Superdex peptide凝胶排阻层析纯化而获得。该抗真菌肽对白腐菌，绿色木霉和链格孢霉的生长有显著的抑制作用。

其不足之处在于，上述抗真菌肽为植物提取物，其抗菌活性较低，且只对特定菌种有一定的抑制作用。

发明内容

本发明是为了克服现有技术的抗真菌肽抗菌活性较低及抑菌种类有限的问题，提供一种梅鱼加工副产品的抗真菌肽的制备方法，该抗真菌肽具有较高的抗菌活性，且该抗真菌肽是从梅鱼的加工副产品鱼头中进行提取，实现废物再利用，且是初次从梅鱼中提取，丰富了抗真菌肽的种类，能更好的对食品进行保质保鲜。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种梅鱼加工副产品的抗真菌肽的制备方法，包括以下制备步骤：

（1）、预处理：将梅鱼鱼头进行清洗后绞碎，在料液比为1:6-9 (m/v)，温度为48-52℃的条件下，用94-96%的甲醇水浴脱脂2-2.2h；脱脂后将上清液倒掉，用纯水将沉淀洗净，将脱脂鱼头肉在0-4℃、11900-12000 r/min条件下离心20-25min，收集沉淀；

（2）、酶解：将鱼头肉加到含有中性蛋白酶的酶解液中进行酶解；其中，中性蛋白酶的浓度为0.05-0.25wt%，酶解液质量为鱼头肉质量的2-4倍，酶解温度为30-45℃，酶解液pH至控制在5-6，酶解时间为5-5.4h；

（3）、过滤得澄清液：向酶解液中添加质量为酶解液1-2wt%的改性果壳活性炭，并将酶解液加热并脱色；将脱色后的酶解液转移至板框过滤池内进行过滤，取澄清液；

所述改性果壳活性炭的制备步骤为：