[发明专利]应用试剂盒和全自动生化仪同时检测两种亚型腺苷脱氨酶同工酶的方法

说明书

本发明涉及生物检测试剂技术领域，特别是涉及一种同时检测两种亚型腺苷脱氨酶同工酶的方法。包括溶解有EHNA的二甲亚砜溶液，所述溶解有EHNA的二甲亚砜溶液中EHNA的浓度为0.8～10mg/ml，与1/2待检样品的体积比为(1～6:)40。所述试剂盒包括上述同时检测两种亚型腺苷脱氨酶同工酶的试剂。本发明提供的同时检测两种亚型腺苷脱氨酶同工酶的方法，能够基于全自动生化仪直接诊断出ADA1缺陷病和ADA2缺陷病，节省了检测时间，且操作简单。填补了现有技术中心无法基于全自动生化仪检测ADA1和ADA2的技术空白点。

技术领域

本发明涉及生物检测试剂技术领域，特别是涉及一种应用试剂盒和全自动生化仪同时检测两种亚型腺苷脱氨酶同工酶的方法。

背景技术

腺苷脱氨酶(ADA)广泛存在于多种组织，有两种不同亚型同工酶ADA1及ADA2。临床上一般仅检测总的ADA，其升高用于提示肝功受损、或结核感染等。近年发现ADA的两种同工酶ADA1缺陷及ADA2缺陷会引发不同的原发免疫缺陷病，原发性免疫病是一类多发于儿童时期的严重、可致命的罕见病，该类疾病病种繁多，涉及基因近四百种，且症状重叠复杂，难以明确诊断。ADA1缺陷为严重的联合免疫缺陷，可致命；ADA2缺陷主要为自身炎症反应，发热、皮疹、血管炎及多系统受损。基因检测虽能给予一定提示，但由于大量致病性不明突变位点的存在，使其诊断存疑。直接对ADA1及ADA2的活性进行检测，可从功能上对两种疾病进行明确诊断。

目前国内医院仅检测总ADA，不能检测两种不同亚型的同工酶。一般为应用全自动生化仪配合相应的ADA检测试剂盒检测，而未开展ADA1和ADA2两种同工酶的检测。有科研实验室应用ADA1特异性抑制剂——EHNA特异性抑制ADA1，进而通过检测剩余ADA活性而明确ADA2的方法，然而一般在科研实验室进行，需要将EHNA加入体积巨大的反应池中进行检测，且一般为手工操作，未应用于临床。目前尚未见到可方便快捷直接应用全自动生化仪同时检测ADA1和/或ADA2的试剂盒。由此可见，能否提出一种方便快捷的应用全自动生化仪检测ADA1及ADA2的试剂及试剂盒，包括其中优化选择的试剂浓度及剂量，成为本领域技术人员亟待解决的技术难题。

发明内容

本发明的一个目的是要提供一种应用试剂盒和全自动生化仪同时检测两种亚型腺苷脱氨酶同工酶的方法，以解决现有技术中采用人工配制和检测的技术难题，所述方法中的试剂盒能够基于全自动生化仪进行自动检测，能够直接诊断出ADA1缺陷病和ADA2缺陷病节省了检测时间，且操作简单。所述同时检测两种亚型腺苷脱氨酶同工酶的试剂中包括用于抑制ADA1活性的溶解有EHNA的二甲亚砜溶液。

进一步优选的，所述溶解有EHNA的二甲亚砜溶液中EHNA的浓度为0.8～10mg/ml，更进一步优选的所述溶解有EHNA的二甲亚砜溶液中EHNA的浓度为5-10mg/ml。

一种同时检测两种亚型腺苷脱氨酶同工酶的试剂盒，所属试剂盒包括上述同时检测两种亚型腺苷脱氨酶同工酶的试剂。

进一步的，所述试剂盒还包括用于检测ADA总活动值的A组试剂。

更进一步优选的，所述A组试剂包括试剂1和试剂2，所述试剂1包括以下组分：25mmol/LpH为8.0Tris-HCL、4mmol/L的4-AA、0.3U/ml的PNP、0.4U/ml的XOD、0.1U/ml的过氧化物酶、稳定剂、防腐剂；所述试剂2包括以下组分：25mmol/LpH为4.0的Tris-HCL、11mmol/L的腺苷、4mmol/L的EHSPT、防腐剂。

进一步的，所述A组试剂加入到全自动生化仪的反应池中，所述A组试剂中溶解有EHNA的二甲亚砜溶液与1/2待测样本按照体积比为(1～6)：40进行混合，完全混匀后，用全自动生化仪采样针取样后，与反应池中的A组试剂混合检测得到ADA2活性值；另外1/2待测样本，用全自动生化仪采样针取样后，与反应池中的所述A组试剂混合检测得到ADA总活性值；ADA1活性值＝ADA总活性值-ADA2活性值。