[发明专利]一种硒香菇多糖的提取分离纯化方法

说明书

本发明公开了一种硒香菇多糖的提取分离纯化方法，利用稀碱提取香菇多糖，然后利用亚硒酸钠和香菇多糖在反应液中反应获得硒香菇多糖。其步骤是：S1、首先对香菇预处理；S2、碱溶性香菇多糖提取；S3、香菇多糖的制备；S4、采用乙醇沉淀法、Sevag法、盐酸法、三氯乙酸法将香菇多糖的分离纯化；S5、利用亚硒酸钠和香菇多糖在反应液中反应获得硒香菇多糖。本发明的硒香菇多糖的提取分离纯化方法，利用亚硒酸钠和香菇多糖在反应液中反应获得硒香菇多糖，通过优化香菇多糖的提取工艺，提高硒香菇多糖的获得率。

技术领域

本发明涉及细胞生物学与分析化学相结合技术领域，具体涉及一种硒香菇多糖的提取分离纯化方法。

背景技术

香菇多糖(Lentinan LNT)是从担子菌门侧耳科伞菌属真菌香菇子实体(Lentinusedodes)中分离提取分离的葡聚糖。研究报道证实，香菇多糖作为免疫增强剂，有多重生物活性，包括免疫调节、抗氧化、抗菌、抗病毒、抗炎症和抗癌等作用。但传统的提取方法提取效率低，纯度不高的缺点。

硒(selenium)是人体必需的微量元素，在人体不同的生理功能中发挥重要作用，对于机体的健康维护，疾病的防治具有显著作用。硒主要以有机硒(如硒代蛋氨酸，硒代半胱氨酸，γ-谷氨酰基Se-甲基硒代半胱氨酸)和无机硒(如硒酸钠和亚硒酸钠)的形式存在。许多流行病学和临床研究表明，生理水平的硒可能具有广泛的生物学效应，包括对心脏病、衰老、氧化应激损伤甚至肿瘤具有防治作用。

硒香菇多糖是将香菇多糖及亚硒酸钠通过化学反应得到的有机化合物。具有抗肿瘤、抗氧化等多种功效。目前合成硒香菇多糖的方法不够成熟，本发明利用亚硒酸钠和香菇多糖在反应液中反应获得硒香菇多糖。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述问题，提供一种硒香菇多糖的提取分离纯化方法，通过优化香菇多糖的提取工艺，提高硒香菇多糖的获得率。

为实现上述目的，达到上述技术效果，本发明是通过以下技术方案来实现：

一种硒香菇多糖的提取分离纯化方法，包括如下步骤：

S1、香菇预处理

将香菇块烘干，粉碎机粉碎过40目筛，得香菇粉末。向香菇粉末中加入石油醚于60℃水浴中加热回流脱脂1h，离心收集残渣，重复脱脂三次，溶剂挥干后，加入80％乙醇磁力搅拌，以除去小分子醇溶物，离心收集残渣，依此过程重复三次，50℃干燥，得脱脂香菇粉末；

S2、碱溶性香菇多糖提取

取脱脂香菇粉末10g置于烧杯中，加入蒸馏水1000rpm磁力搅拌5min使其充分混匀，以1：50固液比例于80℃水浴中热水浸提25min，离心分离上清液，去除水溶性物质，收集残渣，以1：100固液比例加入0.5M氢氧化钠溶液，4℃冰浴中超声提取40min，离心得上清液Ⅰ；所得残渣依照上述方法重复提取一次得上清液Ⅱ，合并两次上清液，并用10％的醋酸溶液中和至pH＝6，用蒸馏水洗涤胶状沉淀反复脱盐后冷冻干燥得碱溶性香菇多糖粗品；

S3、香菇多糖的制备

称取3.00g碱溶性香菇多糖粗品置三口烧瓶中，加入50mL异丙醇和20mL20％NaOH的混合溶液，冰浴搅拌3h使其分散均匀；

室温下，取12g一氯乙酸溶于50mL异丙醇中，再与20mL20％NaOH溶液相混合；通过常压滴液漏斗将混合液缓慢滴加入反应体系中，搅拌反应3h，将反应液升温至60℃继续搅拌30min；