[发明专利]检测布鲁氏菌减毒活疫苗株和野毒株的方法及应用

权利要求书

1.一种检测布鲁氏菌减毒活疫苗株和野毒株的方法，其特征在于，所述方法包括：根据布鲁氏菌减毒活疫苗株的缺失基因设计引物，采用所述引物对待测样品DNA进行扩增，若检测扩增产物中含有特异性DNA片段，则所述待测样品含有布鲁氏菌野毒株。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述布鲁氏菌减毒活疫苗株包括A19、S2、M5、S19或Rev.1中的一种或多种。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述引物包括如下(a)-(c)中的一种或多种：

(a)A19-F：5’-GGGAGGAGGGCAGTTGTT-3'；

A19-R：5'-GCCACCGCATTCCGATAA-3'；

(b)S2-F：5-’GGCGGCACAAGAGGAACT-3’；

S2-R：5'-GCGGGTACGCCTTGATTG-3'；

(c)M5-F：5’-ATTCCCATGACTGAAGAACA-3’；

M5-R:5’-TAACGCTTCCCTCGATTT-3’。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，(a)引物扩增产物的大小为254bp；和/或，

(b)引物扩增产物的大小为300bp；和/或，

(c)引物扩增产物的大小为207bp。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述扩增包括普通PCR扩增、qPCR扩增、RPA扩增或LAMP扩增。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，采用多重PCR的方式进行检测。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测样品来源于布鲁氏菌减毒活疫苗株的被接种体，所述被接种体的接种时间为4-90天。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述被接种体包括牛、羊、猪、犬或人。

9.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其特征在于，所述待测样品为血液、奶样或组织。

10.如权利要求1-9任一项所述的方法在如下(i)-(iii)中的应用：

(i)鉴别布鲁氏菌减毒活疫苗株和布鲁氏菌野毒株；

(ii)检测待测样品是否感染布鲁氏菌；

(iii)鉴别待测样品所感染的布鲁氏菌的类型。