[发明专利]一种用于生物防治虾类病害的甲基营养型芽孢杆菌LW-6菌剂的制备及应用

说明书

本发明所述的一种用于生物防治虾类病害的甲基营养型芽孢杆菌LW‑6菌剂的制备及应用是首次做为微生物制剂用于防治虾类细菌性疾病特别是对幼体弧菌病的生物防治，本发明的菌剂来源于中国秦岭原始森林土壤,属于自然界的有益微生物种类,利用这一菌株进行特定条件下的活化、扩增、发酵、超滤、浓缩等制备工艺具有绿色环保、简单和效率高的特点，发酵成型的固体粉剂活孢子浓度可达800亿/克，且本发明所述的甲基营养型芽孢杆菌LW‑6抗逆性强，对营养要求低，生长繁殖快，于环境中可快速生长和定植，并代谢产生多种抗菌物质及各种酶类等，从而对致病菌产生拮抗、抑制或杀灭作用，从而达到防治虾类细菌性病害的目的，对幼体弧菌病的防治效果可达88.1%，并且其具有对人畜安全，无污染，且无副作用。

技术领域

本发明涉及一种用于生物防治虾类病害的甲基营养型芽孢杆菌LW-6菌剂的制备及应用，属于微生物技术领域。

背景技术

水产养殖是人为控制下繁殖、培育和收获水生动植物的生产活动，其中包括在人工饲养管理下从苗种养成水产品的全过程。虾类养殖是以经济价值较高的虾类为对象，进行人工饲养生产的行业。在虾养殖过程中，虾的病害主要是由苗种携带病原体或者环境受到病原菌污染引起，另一方面由于饲养管理不当，放养前养殖塘没有经过清淤、晒塘、消毒等处理也会给虾带来病原菌，在养殖过程造成细菌增殖，导致虾病害爆发，以幼体弧菌病为代表病的虾细菌性病害是养殖过程中危害较大的病害，在虾苗期、养成期等各个生长阶段均可发生危害。

目前，世界上对虾细菌病防治多为伴饵投喂多种抗生素类药物，但此种细菌病防治方式极易造成虾体内和水环境的药物残留、细菌耐药性增加等一系列防治问题，久而久之使得防治效果大大减弱；同时抗生素药物的成本相对较高，而本发明是一种甲基营养型芽孢杆菌LW-6菌剂是以有益微生物菌来抑制进而灭杀虾幼体弧菌病、细菌性肠道炎、肝胰腺坏死病症等细菌性病害更为有效的生物防治菌剂以及其制作方法，且本发明属于纯生物菌剂，不会产生药物残留、环境污染以及虾病菌和细菌的抗药性，是一种绿色环保高效的治理方法。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种用于生物防治虾类病害的甲基营养型芽孢杆菌LW-6菌剂的制备及应用,该菌制备工艺绿色环保、相对简单、且发酵效率高,该菌剂含有的甲基营养型芽孢杆菌活菌数高，具有生物防治虾细菌病害功能。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为 ：

一种用于生物防治虾类病害的甲基营养型芽孢杆菌LW-6菌剂，采用如下方法制备 ：

（1）将甲基营养型芽孢杆菌LW-6菌株试管斜面接种于平板进行菌落活化和扩增、将扩增好的菌落平板接种于特定液体培养基中进行活化培养70小时，制得活化菌群液体

（2）将步骤（1）制得活化菌群液体在以种子罐体积 10％接种于种子罐中的特定发酵培养液中发酵培养，溶氧量为 20％，转速200rpm，种子罐的温度 36℃，接种发酵菌液 4 小时后，每隔 2 小时对种子罐中的发酵液进行发酵质量检测，直到发酵液菌体生长比较饱满即将出现芽孢时，获得发酵菌种；

（3）将步骤（2）制得的发酵菌种的10％接种于发酵罐中的 NBP 培养液中发酵培养，溶氧量为 20％，转速200rpm，种子罐的温度 36℃，接种发酵 4 小时后，每隔 2 小时对发酵罐进行发酵质量检测，观察菌含量，直到发酵罐中发酵液中的活孢子数达800亿/ml 以上、芽孢含大量于或等于 95％时，立即将发酵液出罐，然后继续超滤浓缩和低温干燥。制备得到菌粉，进行分装和应用。