[发明专利]一株高产纳豆激酶的菌株及利用该菌株制备纳豆的方法

说明书

本发明属于生物工程技术领域，提供了一株高产纳豆激酶的菌株及利用该菌株制备纳豆的方法，所涉及的高产纳豆激酶的菌株，经16SrDNA鉴定为一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，菌株代码为YJY19‑09，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC NO.18402。将该菌株应用于纳豆的生产中，可获得纳豆激酶含量为4000‑5000IU/g的纳豆，高于市售纳豆激酶含量。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，提供了一株高产纳豆激酶的菌株及利用该菌株制备纳豆的方法。

背景技术

纳豆是将大豆煮熟后，接种纳豆菌后发酵形成的食品，纳豆具有很高的营养价值，其蛋白质、纤维素、钙、铁、维生素B、维生素PP、维生素E的含量均高于蒸煮大豆，特别是维生素B的含量比蒸煮大豆高6倍以上。纳豆中还含有较高的活性物质，如纳豆激酶(Nattokinase，NK)、异黄酮、大豆磷脂、糖化酶、超氧化物歧化酶、皂甙素、生育酚、吡啶二羧酸、维生素K2等。自古以来，纳豆在民间一直作为药食兼用食品。大量研究表明纳豆具有多种药理保健功能，经常食用可起到强身健体、预防疾病的作用。

纳豆作为一种功能性食品，纳豆激酶是其最具代表性的功效成分。纳豆激酶不仅具有纤溶酶原激活物活性，而且还能直接消化利用蛋白质纤维。纳豆激酶的体内外溶栓性质通过实验也已得到确定，在体内作用迅速，持续时间长，还能激活体内的纤维蛋白酶，使之温和、持续地提高血液的纤溶活性。因此纳豆激酶通常作为优化纳豆生产工艺的重要指标，然而目前市售纳豆酶活普遍较低。李宏梁在文章《国产与进口鲜纳豆活菌数、感官品质及酶活的分析比较》中检测5种国产鲜纳豆和5种日本鲜纳豆激酶活力，酶活在400～2500IU/g之间。

如何提供纳豆的酶活成为本领域亟待解决的问题，而筛选具有高活力纳豆激酶生产能力的菌株是解决这一问题的关键。

发明内容

本发明针对上述技术存在的不足，提供一株高产纳豆激酶的菌株及利用该菌株制备纳豆的方法，所涉及的高产纳豆激酶的菌株，经16SrDNA鉴定为一株枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，菌株代码为YJY19-09，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC NO.18402。将该菌株应用于纳豆的生产中，可获得纳豆激酶含量为4000-5000IU/g的纳豆，高于市售纳豆激酶含量。

本发明提供的具体技术方案是：

一株枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，菌株命名为YJY19-09，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC NO.18402，形态特征为：革兰氏阳性菌，无荚膜，周生鞭毛；该菌株在普通营养琼脂上形成表面粗糙、白色、有褶皱的菌落。

该菌株YJY19-09的来源：发明人采集滨州地区自制农家豆豉(黄豆先浸泡蒸煮再自然发酵)样品分离纯化单菌落，经过酪素培养基初筛、发酵纳豆检测纳豆激酶活性复筛，并对其生理生化特性、遗传稳定性深入研究后，最终筛选出一株高产纳豆激酶、利用该菌株生产获得高纳豆激酶活性纳豆、易培养且具有遗传稳定性的菌株。发明人对该菌株在中国微生物菌种保藏管理委员普通微生物中心进行了生物保藏，保藏编号为CGMCC NO.18402，经检测其为存活状态。

发明人同时对菌株YJY19-09进行了16SrDNA测序，其序列如Seq ID No：1所示，该序列为菌株的16SrDNA的全序列。

将所测得的16SrDNA序列进行BLAST比对，比对结果显示，菌株YJY19-09的16SrDNA的核苷酸序列与芽孢杆菌属(Bacillussp.)不同菌株的核苷酸序列有大于99％的同源性，与其中明确标记为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)的菌株有100％的同源性；鉴定其为一株枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。

利用该菌株进行高纳豆激酶活性纳豆的生产，具体步骤包括：