[发明专利]具有生物活性的紫花苜蓿茎叶多糖及其硒化改性多糖的制备

权利要求书

1. 具有生物活性的紫花苜蓿茎叶硒化多糖的制备方法，其特征在于，所述制备过程包括取干燥的紫花苜蓿茎叶干草用石油醚、乙醇回流处理，去除脂质和小分子化合物，再用蒸馏水回流冷凝提取2～6次，过滤，减压浓缩，合并浸膏；将中性蛋白酶与浸膏混合，40～60℃培养1～3 h, 80～100℃灭活10～20 min，离心得到上清液；在上清液中加入由正丁醇和氯仿制备的Sevage试剂，所述的正丁醇和氯仿体积比为1:2～1：4, v/v，搅拌一定时间后去除蛋白，离心，收集上清液，用Sevage试剂法去除蛋白2～5次；将上述得到的上清液浓缩，AB-8树脂柱脱色，用蒸馏水洗脱，减压浓缩，得到粗多糖；采用DEAE-52纤维素柱对粗多糖进行分离，用蒸馏水和不同浓度的NaCl溶液进行洗脱；苯酚-硫酸法测定其糖含量；采用Sephadex G-200柱对所得的馏分进行纯化，收集糖含量较多的3个组分，减压浓缩干燥得到3个多糖为APS1，APS2，APS3；

将上述得到的两个产量较大的多糖APS2和APS3在硝酸条件下，亚硒酸钠与多糖在60～80℃下反应4～8 h，反应液经过透析，得到2个硒多糖Se-APS2，Se-APS3；

所述3个紫花苜蓿多糖，其结构片段分别为：APS1：2-O-acetyl-β-D-Manp-(1→3)-α-L-Araf-1(1→4)- α-L-Rhap-(1→，→3)- α-L-Rhap-(1→4)- α-L-Rhap-(1→；APS2：→3)-α-L-Rhap-(1→4)-α-L-Rhap-(1→，→3)-α-D-Galp-(1→4)-α-D-Galp-(1→，β-D-Manp-(1→2)-O-acetyl-β-D-Manp-(1→，β-D-Manp-(1→3)-α-L-Rhap-(1→；APS3：→3)-β-D-Fruf-(1→2)-α-D-Galp-(1→，α-D-Galp-(1→2)- α-L-Rhap-(1→，→3)-α-L-Araf-(1→3)- α-L-Rhap-(1→；

所述的得到的3个紫花苜蓿茎叶多糖，其分子量范围为8.0 KDa至20.0 KDa，由鼠李糖，阿拉伯糖，果糖，甘露糖和半乳糖组成，其摩尔比的范围为（0.20～0.65）:（0.09～0.3）:（0～0.30）:（0～0.20）:（0～0.50）；2种硒化多糖的分子量范围为6.0 KDa至12.0 KDa，硒含量的范围为1.00～3.00 µg/mg。

2.根据权利要求1所述的具有生物活性的紫花苜蓿茎叶硒化多糖的制备方法，其特征在于，紫花苜蓿多糖和硒多糖对DPPH和ABTS自由基均有清除作用，样品的浓度达到5 mg/mL时，清除DPPH自由基的强弱顺序为APS1＜APS2＜APS3＜Se-APS3＜Se-APS2；清除ABTS自由基的强弱顺序为APS3＜APS1＜APS2＜Se-APS2＜Se-APS3，多糖硒化后的抗氧化活性明显强于天然多糖。

3.根据权利要求1所述的具有生物活性的紫花苜蓿茎叶硒化多糖的制备方法，其特征在于，紫花苜蓿硒多糖具有神经细胞保护作用，当Se-APS2和Se-APS3的浓度达到100 μmol/L时，SH-SY5Y细胞的存活率分别为79%和86%。