[发明专利]用于检测AK4基因多态性的探针、引物、试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测AK4基因多态性的探针、引物、试剂盒，其中探针的序列如SEQ ID NO.:1、SEQ ID NO.:4、或SEQ ID NO.:7所示，或者在SEQ ID NO.:1、SEQ ID NO.:4、SEQ ID NO.:7的序列两端加以基团修饰。本发明的用于检测AK4基因多态性的探针、引物、试剂盒，在检测AK4基因多态性时，具有灵敏度高、特异性好、快速、高通量检测等优点。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体的说涉及用于检测AK4基因多态性的探针、引物、试剂盒。

背景技术

腺苷酸激酶（AK）家族同工酶广泛存在于生物体内，是细胞内核苷酸合成的机器，参与细胞内能量和核苷酸代谢。它们可逆的催化ATP和AMP之间磷酸基团的转移，并释放2分子ADP。AK4基因定位于1p31，该酶主要在富含线粒体的组织中表达，如脑，心脏，肾脏和肝脏。AK4既可以以ATP或GTP作为磷酸供体催化dAMP、CMP和dCMP的磷酸化，又可以以UTP作为磷酸供体磷酸化AMP。有研究表明AK4可以调节腺苷酸平衡，从而影响细胞的存活和增殖。AK4 基因在低氧环境下培养的人肝癌细胞系（HepG2）和人胚胎肾细胞（HEK293）中的表达呈相反的趋势，提示AK4基因的表达对于低氧应激细胞具有保护作用。

虽然已知AKs缺陷能够引起一些特殊疾病，但关于AK活性低下而引起的复杂疾病，如退行性疾病却知之甚少。ATP是最重要的携带高能量的分子，细胞在发挥不同功能时，产生ATP的量也不同，整体能量缺乏会导致各种器官衰竭。通过研究能量代谢相关酶，更好的理解磷酸基团转移机制，可以为将来发展治疗由能量代谢紊乱引起的疾病提供坚实的理论基础。

基因多态性构成了不同个体对疾病的易感性、对药物与环境因素不同反应的遗传学基础，选择合适的基因多态性，对从基因水平上认识表型的本质是十分重要。

目前普遍应用的基因多态性检测方法为DNA直接测序法，PCR产物直接进行DNA序列分析，可以明确突变位点，但存在费时费力，成本较昂贵，不适用于对大量样本进行检测等缺点。因此，需要开发一种适合大批量样本检测的方法。

发明内容

本发明的目的首先在于提供3组用于检测AK4基因多态性的探针，该探针的序列如SEQ ID NO.:1、SEQ ID NO.:4、或SEQ ID NO.:7所示；或者在SEQ ID NO.:1、SEQ ID NO.:4、SEQ ID NO.:7的序列两端加以基团修饰；

其中修饰基团为：5′的修饰基团为荧光基团，如FAM、HEX、CY5；3′的修饰基团为淬灭基团，如BHQ1、BHQ2；

具体的说，本发明提供的用于检测AK4（rs17853973）基因多态性的探针为：SEQ IDNO.:1 HEX-CGGGCAAGGGCACCGTGNGCCAGAGGATCGCCCG -BHQ1；

其中N为变异碱基，具体为TA；

所述的探针包括环序列和茎序列，其中环序列为第6~26bp（5′-AAGGGCACCGTGNGCCAGAGGATC-3′），其两侧是两个反向互补的茎序列，茎序列为（5′-CGGGC……GCCCG-3）。

本发明提供的用于检测AK4（rs12074520）基因多态性的探针为：SEQ ID NO.:4FAM- CCATTTTTANTTTTGAAATGG -BHQ1；

其中N为变异碱基，具体为CA；

所述的探针包括环序列和茎序列，其中环序列为第6~16bp（5′- TTANTTTTG-3′），其两侧是两个反向互补的茎序列，茎序列为（5′-CCATTT……AAATGG -3）。

本发明提供的用于检测AK4（rs4915685）基因多态性的探针为：SEQ ID NO.:7CY5- CCTGGTGAACCNTTAGTCCAGG-BHQ2；

其中N为变异碱基，具体为GA；