[发明专利]蒙古栎SSR分子标记及其对应引物和应用

说明书

本发明属于分子生物学DNA标记技术领域，具体涉及一种蒙古栎SSR分子标记及其对应引物和应用。10个SSR位点的核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：10序列，其对应的引物核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO：11至SEQ ID NO：30序列。通过本发明，能够为蒙古栎的鉴定、种质资源保护及良种选育提供技术支撑。

技术领域

本发明属于分子生物学DNA标记技术领域，具体涉及一种蒙古栎SSR分子标记及其对应引物和应用。

背景技术

蒙古栎(Quercus mongolica Fisch.ex Ledeb)属壳斗科、栎属，落叶乔木，高达30米，树皮灰褐色，深纵裂。树冠卵圆形。单叶互生、叶片倒卵形，叶波状齿缘，叶表面深绿色，背面淡绿色，花单性，雌雄同株，坚果卵形或椭圆形，种子具肉质子叶，是中国国家二级珍贵树种，也是中国东北林区中主要的次生林树种。主要分布在中国东北、华北、西北各地，华中地区亦少量分布。在俄罗斯、日本、蒙古及朝鲜半岛也有分布。蒙古栎是营造防护林、水源含量林以及防火林的优良树种，其在用材、工业原料、环境美化和生态恢复等方面具有十分重要的价值。其木材产品也被广泛地用于家具、建筑材料、铁路枕木、各类桶器以及矿柱等；蒙古栎结实丰富，是制作饲料、淀粉、酒精的原料；树皮、叶片、壳斗、提取物为制革、印染和渔业所必须的材料。长期以来，关于蒙古栎的研究主要集中在生态学和森林经营方面，对蒙古栎的遗传改良研究相对较少。目前，蒙古栎良种选育研究以树体生长指标、种子生长指标和生理指标为主，且大多是种源选择，利用这些方法选择出来的良种遗传增益较低，良种产量低，供应能力不足，无法满足生产对良种的需求。随着生物技术的飞速发展，植物组织培养、分子标记辅助育种、基因工程育种等已在林业上大量应用。因此，利用分子标记技术对栎类树种进行遗传改良研究，不仅可以加快育种进程，更能提高育种质量。

SSR(Simple Sequence Repeats)分子标记是近年来发展起来的一种以特异引物PCR为基础的分子标记技术，也称为微卫星DNA(Microsatellite DNA),是一类由几个核苷酸(一般为1～6个)为重复单位组成的长达几十个核苷酸的串联重复序列。每个SSR两侧的序列一般是相对保守的单拷贝序列。SSR分布于整个基因组中，而且其两端的序列一般为相对保守的单拷贝序列，据此可以设计特异引物进行SSR-PCR,以扩增串联重复序列,根据串联重复数的不同，就可以揭示微卫星DN A的多态性。因此，它是一种基于DN A长度多态性的分子标记。SSR与其他分子标记相比具有以下特点：①丰富性；②多态性高；③通用性与保守性；④共显性遗传；⑤以PCR为基础，反应速度快，易于检测；⑥结果稳定可靠，重复性好，便于实现自动化。利用SSR分子标记对栎类林木蒙古栎进行遗传多样性分析及品种鉴定研究，不仅可以从分子水平上分析其种源间的亲缘关系或家系间的遗传分化程度，进而能够大大提高良育种选择效率。

发明内容

本发明的目的在于提供一种蒙古栎SSR分子标记及其对应引物和应用，为蒙古栎种源或家系的鉴定、种质资源保护及良种选育提供技术支撑。

本发明是这样实现的，蒙古栎SSR分子标记，其所对应的核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：10中的10个SSR位点。

蒙古栎SSR分子标记引物，其具有序列表中SEQ ID NO：11至SEQ ID NO：30中的核苷酸序列。

所述的蒙古栎SSR分子标记及对应的SSR引物的核苷酸序列见表1：

表1

所述10个SSR位点的类型和重复单元见表2：

表2

筛选引物多态性过程中的PCR反应体系见表3，PCR反应程序见表4，引物的特性见表5：

表3