[发明专利]一种具有双荧光发射的小分子荧光探针的应用

说明书

本发明属于分子检测技术领域，更具体地，涉及一种具有双荧光发射的小分子荧光探针的应用。该小分子荧光探针与双链DNA相互作用时，在350‑550nm的激发波长激发条件下，出现双荧光发射，其最强荧光发射峰分别为640±5nm和540±5nm。该荧光探针分子由于其独特的分子结构，使得其与双链DNA相互作用时表现出独有的双荧光发射现象，利用这一现象将其应用于制备双链DNA的特异性识别试剂，由此解决现有技术检测dsDNA过程繁琐复杂的技术问题。该荧光探针具有如式(一)所示的结构：其中，R为：或者n为1‑12的整数。

技术领域

本发明属于分子检测技术领域，更具体地，涉及一种具有双荧光发射的小分子荧光探针的应用。具体涉及一种具有聚集诱导发光(AIE)性能的三苯胺多吡啶盐荧光探针，由于其独有的双荧光发射现象，使得该荧光探针适用于特异性识别双链DNA(double-stranded DNA，dsDNA)，在此前提下还具有检测单核苷酸多态性(Single nucleotidepolymorphisms，SNP)及dsDNA损伤的应用。

背景技术

DNA链是由两条序列互补配对的核苷酸构建的双螺旋结构，可携带生物所有遗传信息。近年来，由于其在遗传性疾病，临床诊断和分子生物学中的重要性，对DNA进行了大量研究分析。SNP是基因组中单个核苷酸变异诱导的核酸序列多态性，是生物体中最常见的序列变异形式。SNP的准确检测有助于将区分生物个体的基因组，并为疾病的特定遗传易感性提供临床诊断。

当前大多数SNP诊断方法基于DNA单碱基对突变杂交传感器，其由检测方法和信号转导器构成。用于特异性识别DNA的检测方法通常利用单链DNA(single-stranded DNA，ssDNA)和互补分子探针形成碱基对。为了检测DNA，荧光或电活性标签通常与探针或分析物偶联作为信号转导器以报告杂交情况，其中分子信标是最流行的实例。然而，通过这种杂交检测不仅需要对ssDNA进行复杂的修饰和聚合酶链反应(PCR)扩增，而且还需要变性和分析物杂交，过程繁琐复杂。

最近，阳离子聚噻吩衍生物可快速检测SNP，且不需探针或分析物的任何化学反应。然而，这些阳离子聚噻吩衍生物的精确表征是一个难题，并且需要优化检测灵敏度。此外，杂交是检测所必需的，因为在添加互补DNA链之前必须首先将单链DNA探针与聚噻吩混合。

商业DNA嵌入染料(溴化乙锭，碘化丙锭等)或沟槽结合染料(Hoechst33258等)，比较它们与ssDNA和dsDNA的结合时，光谱位置或振幅几乎没有差异。因此，一种便捷地检测方法是十分必要的，直接检测dsDNA可以使得DNA诊断更快速，灵敏和便捷。

发明内容

针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本发明提供了一种具有双荧光发射的荧光探针的应用，该荧光探针分子由于其独特的分子结构，使得其与双链DNA相互作用时表现出独有的双荧光发射现象，利用这一现象将其应用于制备双链DNA的特异性识别检测试剂，由此解决现有技术检测dsDNA过程繁琐复杂的技术问题。

为实现上述目的，按照本发明的一个方面，提供了一种具有双荧光发射的荧光探针在制备特异性识别双链DNA的检测试剂中的应用，该荧光探针具有如式(一)所示的结构：

其中，R为：或者n为1-12的整数；

该荧光探针与双链DNA相互作用时，在350-550nm的激发波长激发条件下，出现双荧光发射，其最强荧光发射峰分别为640±5nm和540±5nm。

优选地，将该荧光探针分子溶解于水中，制备得到用于特异性识别双链DNA的检测试剂。

优选地，所述检测试剂中荧光探针的浓度不低于1μM。

按照本发明的另一个方面，提供了一种具有双荧光发射的荧光探针在制备检测单核苷酸碱基突变的双链DNA的检测试剂中的应用，该荧光探针具有如式(一)所示的结构：