[发明专利]一种检测外周血FTO蛋白与自身调控元件结合能力的方法与应用

说明书

本发明提供一种DNA探针，所述探针的5′端有生物素标记物，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明还提供了一种检测外周血FTO蛋白与自身调控元件结合能力的方法，包括以下步骤：(1)从检测对象的外周静脉血中提取血细胞蛋白；(2)将所述的DNA探针进行变性和退火变为双链DNA探针；(3)将双链DNA探针与血细胞蛋白混合后进行孵育，通过EMSA技术获得EMSA阻滞迁移条带的灰度值；(4)通过灰度值判断是否干预检测对象。通过检测人的外周血FTO蛋白与自身调控元件结合能力来预测高血脂肥胖人群的发展情况。为高血脂肥胖的早期诊断及发生发展的机制研究提供新检测方法。

技术领域

本发明涉及神经内分泌和分子生物学领域，具体涉及一种检测外周血FTO蛋白与自身调控元件结合能力的方法，可应用于肥胖及代谢异常的早期干预。

背景技术

随着生活水平不断提升，近年来肥胖发生率在不断增长，成为全球范围内可预防的主要死亡原因。肥胖最大危害是导致一系列严重的并发症，尤其是心脑血管疾病、糖尿病、神经精神疾病及恶性肿瘤等重大疾病。因此肥胖人群的早期诊断及干预对预防肥胖相关并发症的发生具有重要意义。

导致肥胖发生的机制十分复杂，涉及到遗传与环境因素。迄今为止，多项重复研究证实多个信号通路及大量基因与肥胖发生密切相关，另外肥胖发生发展还涉及到神经系统与多个组织器官的相互协同作用。这给肥胖的早期诊断及干预造成很大的困难。因此，目前还缺少有显著效果的早期诊断技术。近年来多项研究发现肥胖相关FTO(Fat mass andobesity associated)基因是肥胖发生的关键基因。这在动物模型中得到证实：FTO过表达小鼠表现出肥胖，而FTO敲除小鼠表现瘦的特征。可见FTO的表达水平对体重控制非常关键。

本发明人研究发现FTO在短期高脂饮食小鼠中的表达不发生改变；而在长期高脂饮食诱导的肥胖小鼠的下丘脑中FTO表达上调，而在其他组织器官如大脑、小脑、肝脏及脂肪等均表现为稳态表达。通过进一步研究，发明人发现FTO通过与自身基因启动子调控元件相结合参与自身负反馈调控，因此，通过这种调控机制长期高脂饮食诱导的肥胖小鼠下丘脑中这种自身负反馈调控机制受到破坏，造成FTO表达上调。

本发明人通过研究证实小鼠下丘脑中特异性负反馈调控机制在代谢调控中枢(即下丘脑)中表达水平决定了体重的变化。由于FTO负反馈调控元件在人与小鼠中具有高度保守性(参见附图1)，因此推测人体中同样存在这一调控机制。研究发现，与肥胖小鼠的下丘脑相类似，在高血脂肥胖人群外周血细胞中FTO基因自我负反馈机制被打破导致FTO蛋白表达上调。因此外周血FTO蛋白与自身调控元件结合能力的检测可作为高血脂肥胖人群早期监测的重要手段，并且可用于进一步探索血细胞FTO上调在肥胖条件下高血脂的发生发展过程中的作用机制。

迄今为止，利用这种调控制剂可作为高血脂肥胖人群早期监测的重要手段，对肥胖进行预测和干预，国内外尚未见报道。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供检测外周血FTO蛋白与自身调控元件结合能力的方法与应用。通过检测人的外周血FTO蛋白与自身调控元件结合能力来预测高血脂肥胖人群的发展情况，从而为高血脂肥胖的早期诊断及发生发展的机制研究提供新检测方法，为肥胖易感人群早期采用干预措施提供有效的监测手段。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

本发明提供了一种DNA探针，所述探针的5′端有标记物，其核苷酸序列如SEQ IDNO：1所示。

优选地的，所述标记物为生物素。

本发明还提供了如上所述DNA探针在制备用于检测肥胖的试剂中的应用。

优选地的，所述肥胖为高血脂肥胖。

在本发明还提供了如上所述DNA探针在检测外周血FTO蛋白与自身调控元件结合能力中应用。