[发明专利]一种木薯CAMTA基因及其抑制表达载体的构建和抗病应用

说明书

本发明提供了一种木薯CAMTA基因及其抑制表达载体的构建和抗病应用，其从木薯中分离获得一种CAMTA基因。木薯CAMTA基因抑制表达载体的构建：提取华南124号木薯叶片中RNA并反转录为cDNA，以CAMTA基因5’端1‑600 bp片段作为病毒诱导基因沉默体系特异性核酸沉默片段，以获得的cDNA为模板扩增得到CAMTA基因5’端1‑600 bp片段，胶回收后连接到TRV病毒诱导基因沉默载体pTRV2中，得到pTRV‑MeCAMTA基因沉默表达载体。通过构建该基因的沉默表达载体，注射木薯叶片，获得有效的瞬时MeCAMTA基因沉默木薯，为研究基因功能提供了一个有效的方法。

技术领域

本发明属于植物基因工程和技术领域，具体而言，涉及一种增强木薯对病原菌Xam（Xanthomonas axonopodis pv. manihotis）抗性的MeCAMTA基因，同时还涉及一种木薯CAMTA基因沉默体系及表达载体的构建方法，还涉及一种木薯CAMTA基因沉默表达载体在增强植物对病原菌Xam抗性中的用途。

背景技术

病毒诱导的基因沉默体系（Virus-induced gene silencing，VIGS）是被用于表征植物中某种基因功能的一种基因转录抑制技术。近年来，多种VIGS载体相继在植物中得到广应用。其中，烟草脆裂病毒（TRV）是目前应用最广泛的载体，它是由TRV1与TRV2两条病毒链组成，TRV1用于辅助载有靶基因片段的TRV2在植物体内移动。反向遗传学是鉴定基因功能的重要手段，其最关键步骤是通过遗传转化以实现基因的表达或沉默。然而，非模式植物因自身复杂的遗传背景使其研究困难加大，转化体系操作复杂，耗时费力。而VIGS技术具有周期短、效率高、成本低等优点，同时VIGS技术具有快速鉴定基因功能、避免遗传转化的特点。

木薯亦称树薯，大戟科（Euphorbiaceae）植物，学名为Manihot esculenta，原产于美洲热带地区的亚马逊河流域，是世界七大作物之一。目前，危害国内木薯的病害有7种，其中真菌病害6种，细菌病害1种。木薯细菌性萎蔫病是由地毯草黄单胞木薯萎蔫致病变种（Xanthomonas axonopodis pv. manihotis）所引起的，是国际上木薯生产国的重要检疫对象，也是中国的外检对象，带病植株和产品能够传播该病。目前尚无该病菌侵染其他作物的报告。普查结果表明，该病可造成木薯产量损失估计在20%以上，淀粉出粉率减少40%。