[发明专利]一种去氢表雄酮及其α-异构体的分析方法

说明书

本发明公开了一种去氢表雄酮（3β‑羟基雄甾‑5‑烯‑17‑酮）的分析方法，通过HPLC法进行分析，具体采用苯基柱，以乙醇、乙腈和水为流动相，实现去氢表雄酮的精准检测。本发明的分析方法操作简便，提高了分离效率及检测的准确度。

技术领域

本发明涉及甾体药物分析技术领域，具体涉及一种去氢表雄酮及其α-异构体的分析方法。

背景技术

去 氢 表 雄 酮 ，英 文 名 称： Dehydroepiandrosterone，化学名：3β-羟基-5-雄烯-17-酮，分子式为 C₁₉H₂₈O₂ 。去氢表雄酮是用于制造甾体药物的重要中间体和原料，同时具有延缓衰老，保持青春活力；增强体能，改善情绪和睡眠，提高记忆力，调节免疫系统功能，提高肌体免疫力等功效。

在实现本发明的过程中，发明人发现现有技术中至少存在如下问题：近年来，越来越多的厂家利用植物甾醇发酵产物雄烯二酮（4-AD）为原料经过酯化、缩酮、还原、水解来合成去氢表雄酮，其合成路线如下：

由于该工艺第三步还原反应采用硼氢化钠进行还原，还原过程产生异构体杂质，经过水解后变成α-异构体。

现有去氢表雄酮（DHEA）的液相常规检测方法为：色谱柱 ：15 cm×4.6 mm，5µm，苯基色谱柱；流动相：45%乙腈（V/V）；流速：1.0 mL/min。检测波长：210 nm。

由于DHEA与α-异构体的极性相似，常规检测方法分离DHEA及α-异构体的效果较差，无法获取准确数据。

发明内容

为了解决现有分析技术分离效果差的问题，本发明提供一种全新的去氢表雄酮及其α-异构体分析方法。

为实现上述目的，一种去氢表雄酮及其α-异构体的分析方法，采用HPLC法进行分析，其特征在于：

色谱条件设置为：

色谱柱：采用苯基柱；

柱温：30-35℃；

流动相：以乙醇、乙腈和水为流动相，各组分的体积比为：乙醇：乙腈：水= (15~20)：(15~20) ：(60~70)；

流速为：1.0~1.2 ml/min；

检测波长：200-210nm；

具体分析方法为：

取检测样品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释成浓度为2.0~2.5mg/ml的溶液，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。

作为优选，所述苯基柱采用的型号为Suplex PKB-100，250*4.6mm，5µm。

作为优选，所述记录色谱图至主峰保留时间的1.2-1.5倍。

有益效果：

本发明提供去氢表雄酮及其α-异构体的分析方法，易于操作，该方法优点如下：

1）设备要求不高，使用普通的液相色谱仪即可。选用苯基柱采用的型号为SuplexPKB-100，250*4.6mm，5µm，柱子分离效率较高。

2）流动相选用的乙醇、乙腈和水，普通易得，可行性高。

3）操作过程简单方便，杂质分离效果较好，灵敏度高，易于控制，检测成本低，并具有良好的精密度、稳定性和重复性，α-异构体与DHEA的分离度≥1.5。

附图说明

图1是现有常规分析方法检测图谱。