[发明专利]分枝杆菌及其应用

说明书

本发明公开了一种分枝杆菌及其应用，其分类命名为分枝杆菌JYC‑07，于2017年6月9日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2017325。本发明从自然环境中筛选并分离得到一株能够将坎利酮微生物转化为9α‑羟基坎利酮的菌株Mycobacterium sp.JYC，并进一步通过基因工程获得一株高产3‑甾酮‑9α羟基化酶的菌株Mycobacterium sp.JYC‑07，该菌株能够将坎利酮高效转化为9α‑羟基坎利酮，转化率超过90%，对于扩展甾体原料药物坎利酮的用途有着非常重要的意义，具有很好的产业化前景。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种分枝杆菌及其应用。

背景技术

甾体类药物作为仅次于抗生素的世界第二大类药物，对机体起着非常重要的调节作用。不同的甾体药物分子结构均由甾体类药物中间体衍生而来，9α-羟基坎利酮是甾体类药物合成过程中重要的中间体，在甾体工业化生产中起着重要作用。利用9α-羟基坎利酮作为前体物可以合成氢化可的松、醋酸氢化可的松、醋酸可的松、可的松、泼尼松龙、醋酸波尼松龙、泼尼松、依普利酮、倍他米松、地塞米松、曲安奈德、醋酸曲安奈德、布地奈德、地索奈德、环索奈德等多种皮质激素类甾体原料药产品，具有重要的商业价值。因此，获得经济高效地制备9α-羟基坎利酮方法势在必行。

制备9α-羟基坎利酮的关键步骤是在坎利酮的第9位碳上引入一个α羟基，化学方法合成9α-羟基坎利酮存在合成步骤多、专一性差，副反应多、收率低等问题，同时生产过程中需要使用多种有毒化学试剂，环境污染非常严重。

与传统化学合成方法相比，微生物转化技术具有反应步骤少、条件温和、立体选择性高、副反应少以及环境友好等优点，能够有效的克服一些化学合成法的不足，因此开发高效的微生物转化技术已经逐渐成为甾体医药工业重要的发展方向。

目前，已有文献公开了采用微生物转化技术将坎利酮转化为11α-羟基-坎利酮（参见文献1～文献5）。

但是，至今尚未发现采用微生物转化技术将坎利酮转化为9α-羟基坎利酮的文献报道。

文献1：中国专利文献CN1727494A，公开日为2006年2月1日。

文献2：中国专利文献CN101845474A，公开日为2010年9月29日。

文献3：中国专利文献CN103255192A，公开日为2013年8月21日。

文献4：中国专利文献CN103665083A，公开日为2014年3月26日。

文献5：中国专利文献CN104046675A，公开日为2014年9月17日。

发明内容

本发明的目的在于解决上述问题，提供一种能够将坎利酮微生物转化为9α-羟基坎利酮的分枝杆菌及其应用。

实现本发明目的的技术方案是：一种分枝杆菌，其分类命名为分枝杆菌JYC-07（拉丁文名称为Mycobacterium sp. JYC-07），保藏单位为中国典型培养物保藏中心，地址为湖北省武汉市武汉大学，保藏日期为2017 年6月9日，保藏编号为CCTCC NO：M 2017325。

上述分枝杆菌JYC-07在制备9α-羟基坎利酮中的应用，具有以下步骤：

①种子培养：将分枝杆菌JYC-07接种于含碳源和氮源的种子培养基中，在100～500rpm的转速以及25～35℃的温度下进行种子培养12～60h，得到种子培养液；

②发酵培养：将步骤①得到的种子培养液接种于含有碳源、氮源以及无机盐的发酵培养基中，在100～500rpm的转速以及25～37℃的温度下进行发酵培养24～72h，得到发酵液；