[发明专利]基于SiO2

权利要求书

1.一种基于SiO₂核酸探针以及杂交链信号放大的Ag⁺检测方法，其特征在于，所述的检测方法不用于疾病诊断，包括下述步骤：

1）DNA探针与SiO₂微球的偶联;将氨基化修饰的SiO₂微球与DNA探针P1在偶联剂作用下进行偶联，得到SiO₂-P1；

2）定量检测Ag^+_；将SiO₂-P1与DNA探针P2，加入到缓冲液中，混匀，然后加入杂交链反应探针H1和荧光探针Cy5-H2，加入待检测目标Ag⁺，充分混匀，孵育；在反应完成后，通过使用离心机离心除去上清液，并将沉淀物重悬于水中，测量Cy5荧光信号强度；

DNA探针P1为：TCAGCCCGGC或者AAAAATCAGCCCGGC；DNA探针P2为：AGTCTAGGATTCGGCGTGGGTTAAGCCCCCCTGA或者AGTCTAGGATTCGGCGTGGGTTAAAAAAAGCCCCCCTGA；

在Ag⁺存在时，P1和P2通过形成C-Ag⁺ -C结构结合； P2的后半部分是杂交链式反应的引发链，使得 SiO₂-P1-P2耦合物可以连续打开H1和 H2茎环结构来引发HCR，从而使得整个HCR 产物都连接在了SiO2微球上。

2.根据权利要求1所述的基于SiO₂核酸探针以及杂交链信号放大的Ag⁺检测方法,其特征在于，所述的缓冲液为柠檬酸钠缓冲溶液。

3.根据权利要求1所述的基于SiO₂核酸探针以及杂交链信号放大的Ag⁺检测方法,其特征在于，步骤2）的具体步骤为：将步骤1）中连接的10μL DNA-SiO₂探针和0.7μL 10μmol/LDNA探针P2加入到25μL柠檬酸钠SSC缓冲液中，充分混匀，然后加入1.5μL的1μM杂交链反应探针H1和1.5μL的1μmol/L Cy5-H2；最后，加入目标Ag⁺，充分混匀，在37°C下孵育60分钟；在反应完成后，通过使用离心机以11,000rpm离心10分钟，除去上清液，并将沉淀物重悬于50μL水中，并通过AzureC600测量Cy5荧光信号强度。