[发明专利]适用于DNA编码化合物测序文库测序的引物

说明书

本发明公开了一种适用于DNA编码化合物库测序的测序引物，它是由DNA编码化合物扩增引物序列、接头序列与测序引物序列连接而成的序列。本发明提供的引物可以提高DNA编码化合物库的测序质量，还可实现一步测序，应用前景优良。

技术领域

本发明公开了一种适用于DNA编码化合物测序文库构建测序的引物。

背景技术

DNA编码化合物库技术结合了组合化学和分子生物学技术，通过将一个片段化合物与一段独特序列的DNA在分子水平进行连接，利用组合化学的“组合-拆分”策略通过两个至多个循环快速地构建数量巨大的化合物库。其中，化合物库中每一个化合物都由不同片段化合物组成，并由相应的特异碱基序列的DNA进行编码标识。目前工业上应用的DNA编码化合物库的规模可以达到千亿至万亿级，能通过筛选和测序的方法进行识别。该技术使得先导化合物的筛选变得前所未有的快捷和高效，已成为下一代化合物库筛选技术的趋势，并开始在制药行业广泛应用，产生了诸多积极的效果(Accounts of Chemical Research，2014，47，1247-1255)。

经过筛选后得到的DNA编码化合物需要通过测序确定其独特的DNA编码序列标识，才能分析得到其相应的结构信息。DNA编码化合物测序与常规的基因组DNA测序不同，DNA编码化合物由一系列的化合物混合物与其对应的DNA标签组成，因此需要扩增出DNA编码化合物的双链DNA进行测序。常规基因组DNA需要通过片段化之后进行建库测序，而DNA编码化合物的片段通常在100-150bp，不需要通过片段化，直接扩增出目的片段进行建库测序。常规基因组DNA的碱基多样性较好，而DNA编码化合物库使用的碱基多样性较差，使用常规测序方法对DNA编码化合物进行测序时，测序质量较低。另外常规建库方法先扩增出DNA编码化合物的双链DNA，经过末端修复加A、连接测序接头和PCR扩增形成测序文库，该方法需要四步操作，特别是多步PCR会引入更多的扩增偏差，从而影响DNA编码化合物的筛选样品富集化合物对应DNA分子的真实性。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种适用于DNA编码化合物测序的扩增引物及其使用方法。本发明还提供了一种测序引物，只需用一步PCR扩增即可得到测序文库，进而完成测序，极大节省时间和成本，且更能反应DNA编码化合物的筛选样品富集化合物对应DNA分子的真实性。

本发明提供了一种适用于DNA编码化合物库测序的扩增引物，它包括接头序列、DNA编码化合物扩增引物序列连接而成的序列。

其中，所述接头序列的长度为2-8bp。

其中，所述引物的前5-8个碱基的A、T、C、G的含量均在10％～40％范围内；优选的，含量在20％～30％范围内。

前5～8个：是指前5个、前6个、前7个或者前8个。

其中，接头序列与DNA编码化合物扩增引物序列不形成互补序列、回文序列、发卡结构。

其中，所述引物中不出现3个以上连续的相同碱基、5个以上连续的配对碱基。

配对碱基指GC或AT，即不出现GCGCC这种情况。

本发明还提供了一种适用于DNA编码化合物库测序的测序引物，它是由前述引物与测序引物序列连接而成的序列。

优选地，所述引物由测序引物序列、接头序列、DNA编码化合物扩增引物序列依次连接而成的序列。

本发明还提供了一种适用于DNA编码化合物测序文库构建的方法，包括以下步骤：

(1)使用前述的测序引物对筛选后的DNA编码化合物进行PCR扩增；

(2)对PCR产物进行纯化。

其中，所述纯化的方法是：吸附柱纯化方法、电泳纯化方法或磁珠纯化方法。