[发明专利]基于微孔滤膜的真菌孢子分离装置及其系统和分离方法

权利要求书

1.基于微孔滤膜的真菌孢子分离装置，其特征在于，包括由上至下依次连接的上层进样池(1)、上层硅胶胶圈(3)、上层微孔滤膜(4)、上层引流管(6)、上层卡夹(7)、下层进样池(8)、下层硅胶胶圈(10)、下层微孔滤膜(11)、下层引流管(13)以及下层卡夹(14)；

所述上层进样池(1)以及所述下层进样池(8)均为空心圆柱体；所述上层进样池(1)的底部设置有上层进样口(2)；所述下层进样池(8)的底部设置有下层进样口(9)；

所述上层进样池(1)与所述上层引流管(6)依靠所述上层卡夹(7)紧密连接；所述下层进样池(8)与所述下层引流管(13)依靠所述下层卡夹(14)紧密连接；

所述上层引流管(6)的下端依次穿过所述上层卡夹(7)的中部、穿入所述下层进样池(8)的内部；

其中，所述上层微孔滤膜(4)的微孔孔径小于待去除的大细胞的直径，且所述上层微孔滤膜(4)的微孔孔径大于真菌孢子的直径与待去除的小细胞的直径；所述下层微孔滤膜(11)的微孔孔径小于真菌孢子的直径，使得含有待去除细胞的体液在经过所述上层微孔滤膜(4)时避免待去除的大细胞穿过所述上层微孔滤膜(4)，同时使得真菌孢子和待去除的小细胞穿过所述上层微孔滤膜(4)，再使得真菌孢子残留在所述下层微孔滤膜(11)上。

2.根据权利要求1所述的基于微孔滤膜的真菌孢子分离装置，其特征在于，所述上层微孔滤膜(4)和所述下层微孔滤膜(11)均采用聚对二甲苯Parylene C制成。

3.根据权利要求1所述的基于微孔滤膜的真菌孢子分离装置，其特征在于，所述上层微孔滤膜(4)的微孔与微孔之间的间距和所述下层微孔滤膜(11)的微孔与微孔之间的间距均小于非俘获目标的直径。

4.根据权利要求1所述的基于微孔滤膜的真菌孢子分离装置，其特征在于，所述上层微孔滤膜(4)和所述下层微孔滤膜(11)的微孔形状为正六边形或正方形。

5.根据权利要求1所述的基于微孔滤膜的真菌孢子分离装置，其特征在于，所述上层硅胶胶圈(3)设置在所述上层进样口(2)的下边缘；所述上层硅胶胶圈(3)用于避免体液在经过所述上层微孔滤膜(4)时从侧面漏出；

所述下层硅胶胶圈(10)设置在所述下层进样口(9)的上边缘；所述下层硅胶胶圈(10)用于避免经过所述上层微孔滤膜(4)过滤后的体液在经过所述下层微孔滤膜(11)时从侧面漏出。

6.根据权利要求1所述的基于微孔滤膜的真菌孢子分离装置，其特征在于，所述上层进样池(1)、所述上层引流管(6)、所述下层进样池(8)以及所述下层引流管(13)均采用树脂材料制成。

7.应用基于微孔滤膜的真菌孢子分离装置的系统，其特征在于，包括权利要求1至6任一所述的基于微孔滤膜的真菌孢子分离装置和离心管(15)；

所述基于微孔滤膜的真菌孢子分离装置放置在所述离心管(15)中；其中，所述上层进样池(1)、所述上层引流管(6)、所述下层进样池(8)以及所述下层引流管(13)各自的最宽处外径与所述离心管(15)的内径匹配。

8.根据权利要求7所述的应用基于微孔滤膜的真菌孢子分离装置的系统，其特征在于，所述离心管(15)为50mL普通离心管。

9.基于微孔滤膜的真菌孢子分离装置的系统的分离方法，其特征在于，所述分离方法应用于权利要求7或8所述的应用基于微孔滤膜的真菌孢子分离装置的系统，所述分离方法包括以下步骤：

步骤S11，使用75％乙醇润湿所述上层微孔滤膜(4)；

步骤S12，使用磷酸盐缓冲液冲洗所述上层微孔滤膜(4)，除去所述上层微孔滤膜(4)上残留的75％乙醇；

步骤S13，将体液从所述上层进样池(1)加入所述基于微孔滤膜的真菌孢子分离装置中；

步骤S14，在重力的驱动下，所述体液通过所述上层微孔滤膜(4)；其中，在重力的驱动下，所述体液中的待去除的大细胞被滞留在所述上层微孔滤膜(4)上，而所述体液中的真菌孢子、待去除的小细胞以及其余体液穿过所述上层微孔滤膜(4)，进入所述上层引流管(6)后流入所述下层进样池(8)，并与所述下层微孔滤膜(11)接触；

步骤S15，取出所述上层微孔滤膜(4)，读出结果；

步骤S16，对取下了所述上层进样池(1)、所述上层微孔滤膜(4)、所述上层引流管(6)、所述上层卡夹(7)的应用基于微孔滤膜的真菌孢子分离装置的系统施加外力，使得所述真菌孢子滞留在所述下层微孔滤膜(11)上，所述待去除的小细胞和其余体液穿过所述下层微孔滤膜(11)，通过所述下层引流管(13)进入所述离心管(15)的底部；

步骤S17，使用磷酸盐缓冲液，冲洗所述下层微孔滤膜(11)；

步骤S18，取下所述下层微孔滤膜(11)，使用钙荧光白对下层微孔滤膜(11)进行染色，在荧光显微镜下检测是否存在真菌孢子；之后将下层微孔滤膜(11)折叠放入Eppendorf管中，加入裂解液，进行高温加热提取DNA，再进行多聚酶链式反应进行分子水平检测，所述分子水平检测用于检测真菌孢子的种类以及含量数据。