[发明专利]一种增强抗肿瘤免疫活性的免疫细胞的制备方法及其应用

说明书

本发明公开一种增强抗肿瘤免疫活性的免疫细胞的制备方法及其应用。首先从血液中提取的全免疫细胞，将上述免疫细胞加入到70‑80％汇合的贴壁培养的诱导型多能干细胞中一起培养，培养12‑48小时，从共培养容器中分离出免疫细胞，该免疫细胞就是增强了抗肿瘤免疫活性的免疫细胞。该方法制备的免疫细胞可以应用于体内杀伤肿瘤细胞以及体外抗肿瘤试验。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种增强了抗肿瘤免疫活性的免疫细胞的制备方法及其应用

背景技术

肿瘤细胞往往会分泌多种可溶性成分，这些成分能够抑制免疫细胞发挥抗肿瘤免疫，导致肿瘤细胞所谓的“逃避免疫监视”并形成肿瘤。目前大多采用细胞因子的激活法和采用基因工程的办法在免疫细胞特别是T细胞中转入识别肿瘤抗原的基因来提高免疫细胞对肿瘤细胞的识别和清除。但是细胞因子的激活法通过一阵临床应用后发现效果并不是很理想；而通过基因工程的方法提高免疫细胞的免疫功能虽然是非常有前途的治疗方法，比如利用TCR基因修饰的自体淋巴细胞来治疗已经转移的黑色素瘤【Hong等.ClinicalCancer Research October 2010,16:4892；Abad等.J Immunother.2008,31(1):1–6.Zhao等.J Immunol 2005,174:4415-4423】，但是该方法成本高技术性强，况且不同的肿瘤具有不同的肿瘤抗原，导致不同的肿瘤需要转入不同的识别肿瘤抗原的TCR基因，所以比较难做到广谱性及工业制备，给应用带来难度。

发明内容

本发明的目的是提供一种增强抗肿瘤免疫活性的免疫细胞的制备方法及其应用，该方法比较方便，既有较好的效果，又具有广谱性，比较适合工业制备。

增强抗肿瘤活性的免疫细胞采用以下方法制备：

首先从血液中提取的全免疫细胞(即去除红细胞后的血液白细胞)，将上述免疫细胞加入到70-80％汇合的贴壁培养的诱导型多能干细胞(induced pluripotent stemcells，iPS cells)中一起培养，培养12-48小时(优选为24h)，从共培养容器中分离出免疫细胞，该免疫细胞就是增强了抗肿瘤免疫活性的免疫细胞。

应用：

这些免疫细胞通过与诱导型多能干细胞共培养后，即获得了抵抗肿瘤细胞分泌物的抑制免疫的作用的能力，从而使免疫细胞碰到肿瘤细胞时能够正常发挥其识别、清除肿瘤细胞的作用。这些细胞可以被应用于非治疗目的的体外抗肿瘤试验(将上述增强了抗肿瘤活性的免疫细胞与肿瘤细胞体外共培养24-48小时，进行体外杀伤肿瘤细胞试验观察)，也可应用于体内杀伤肿瘤细胞(将上述增强了抗肿瘤免疫活性的免疫细胞注射入荷瘤生物体的血液系统中，以让其实施体内杀灭肿瘤细胞的作用，起到抗癌作用)，比如杀伤实体瘤和血液肿瘤细胞等。

本发明的有益效果：

通过与肿瘤细胞的共培养，可以制备出抵抗肿瘤细胞分泌物的抑制免疫作用的能力的免疫细胞，从而使免疫细胞碰到肿瘤细胞时能够正常发挥其识别、清除肿瘤细胞的作用。

附图说明

图1是增强了抗肿瘤免疫活性的免疫细胞与肿瘤细胞体外共培养后，其对肿瘤细胞的杀伤力比较图。其中＊P<0.05与对照相比；＊＊P<0.01与对照相比。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步的分析。

实施例1：诱导型多能干细胞的传代培养