[发明专利]非洲猪瘟病毒合成肽ELISA抗体检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种非洲猪瘟病毒合成肽ELISA抗体检测试剂盒。该试剂盒包括酶标板、阳性对照血清、阴性对照血清、酶标二抗、样品稀释液、20倍浓缩洗涤液、底物液A、底物液B、终止液，其中所述酶标板包被有非洲猪瘟病毒抗原表位多肽组合物。该抗原表位多肽组合物为为序列表中序列1所示的多肽、以及序列表中序列2所示的多肽和序列表中序列3所示的多肽中的一种或两种以上的任意组合。本试剂盒使用化学合成抗原肽包被酶标板，抗原用量少、灵敏性和特异性高，可以高效地检测是否存在感染非洲猪瘟病毒抗体。本发明试剂盒敏感性高、特异性好、且操作便捷，具有良好的市场前景。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，更具体地，本发明涉及一种非洲猪瘟病毒合成肽ELISA抗体检测试剂盒。

背景技术

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)的病原体是非洲猪瘟病毒(ASFV)，ASFV属于非洲猪瘟病毒科(Asfarviridae)非洲猪瘟病毒属(Asfivirus)。ASFV是囊膜病毒，粒子直径平均为200nm左右；病毒基因组为双链DNA分子，长170-193kb，编码超过150个多肽，其中至少有50个组成了病毒颗粒的不同结构域。80nm的病毒核心包含病毒基因组和核蛋白p10和pA104R，病毒核心由p35、p15、p150、p37、p34和p14蛋白组成的病毒衣壳包裹；围绕着病毒衣壳的是两层脂质分子，内层囊膜由p54、p17、pE248R和p12组成，衣壳结构含有p72、pE120R和pB438L；病毒通过质膜出芽，从宿主细胞释放，在此过程中获得的外层囊膜包含蛋白p24、CD2v、p30和p12。

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)引起猪的一种急性、热性、高度接触性动物传染病，临床上以高热、网状内皮系统出血和高死亡率为特征，易感猪群的病死率高达100％。鉴于该病的严重危害性，世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定报告动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。目前针对ASF没有可用的疫苗，事实上也从未成功研制出过有效的ASF商品化疫苗。对该病的控制严格依赖于动物检疫、生物安全措施和扑杀。研发疫苗面临的技术挑战包括以下几个方面：作为已知最大的DNA病毒之一，ASFV基因尚未鉴定和确定功能；没有可用于疫苗生产的病毒增殖细胞系；具有多个不同表型特征的ASFV基因型，候选疫苗的研发中基本没有交叉保护；研制的疫苗既要可用于家猪注射免疫，同时也可以在丛林传播循环的情况下能够对野猪及潜在的其他野生动物进行口服免疫。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测非洲猪瘟病毒抗体的间接ELISA检测试剂盒，该试剂盒利用非洲猪瘟病毒p30、p54和p72抗原表位多肽作为包被抗原，建立了一种特异性、敏感性和重复性好的间接ELISA方法，用于检测猪血清中是否含有非洲猪瘟病毒抗体。

为了达到上述目的，本发明首先筛选得到了性能优异的非洲猪瘟病毒抗原表位多肽组合物，本发明提供的非洲猪瘟病毒抗原表位多肽组合物，为序列表中序列1所示的多肽、序列表中序列2、序列表中序列3所示的多肽中的一种或两种以上的任意组合。当所述多肽组合物为序列1所示的多肽、序列2所示的多肽、序列3所示的多肽中的两种时，两种多肽的质量比为(0.5～1.5)：(0.5～1.5)；优选的，它们的质量比为1：1；当所述多肽组合物为序列1所示的多肽、序列2所示的多肽、序列3所示的多肽中的三种时，任意三种多肽的质量比为(0.5～1.5)：(0.5～1.5)：(0.5～1.5)；优选的，它们的质量比为1：1：1；

本发明还要求保护非洲猪瘟病毒抗原表位多肽，为序列表中序列1所示的多肽、序列表中序列2所示的多肽或序列表中序列3所示的多肽。

本发明的非洲猪瘟病毒合成肽ELISA抗体检测试剂盒，包括酶联反应板、阳性对照血清、阴性对照血清、酶标二抗、样品稀释液、20倍浓缩洗涤液、底物液A、底物液B、终止液，其中所述酶联反应板包被有非洲猪瘟病毒抗原表位多肽组合物。

所述酶联反应板为可拆卸96孔酶标板；所述非洲猪瘟病毒抗原表位多肽组合物中的多肽均为化学人工合成得到。