[发明专利]一种deoB基因改造的重组菌株及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的序列为SEQ ID NO:1所示的野生型deoB基因编码序列第1049位碱基由鸟嘌呤（G）突变为腺嘌呤（A）后得到的序列。

2. 根据权利要求1所述的多核苷酸，所述突变后的多核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

3.重组蛋白，其由权利要求1的多核苷酸序列编码。

4. 根据权利要求3所述的重组蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。

5.重组载体，包括权利要求1所述的多核苷酸。

6.一种重组菌株，含有权利要求1所述的多核苷酸。

7.根据权利要求6所述的重组菌株，其含有权利要求5所述的重组载体。

8.根据权利要求7所述的重组菌株，其特征在于，是将所述重组载体导入宿主菌株中重组形成。

9. 根据权利要求8所述的重组菌株，其特征在于，所述宿主菌株为E. coli K12菌株、E. coli CGMCC 7.232菌株。

10.一种如权利要求6-9任一项所述的重组菌株的构建方法，包括如下步骤：

改造如SEQ ID NO:1所示的野生型deoB基因开放阅读框区域的核苷酸序列，使其第1049位碱基由鸟嘌呤（G）突变为腺嘌呤（A），得到包含突变的deoB基因编码序列的产L-苏氨酸重组菌株。

11.根据权利要求10所述的重组菌株的构建方法，所述突变后的核苷酸序列如SEQ IDNO:2所示。

12.根据权利要求10所述的重组菌株的构建方法，包括如下步骤：

（1）改造如SEQ ID NO:1所示的野生型deoB基因开放阅读框区域的核苷酸序列，使其第1049位碱基由鸟嘌呤（G）突变为腺嘌呤（A），得到突变的deoB基因开放阅读框区域多核苷酸序列；

（2）将所述突变的多核苷酸序列与质粒连接，构建重组载体；

（3）将所述重组载体导入宿主菌株，得到所述的产L-苏氨酸重组菌株。

13. 根据权利要求12所述的重组菌株的构建方法，所述步骤（1）包括：突变的deoB基因编码区构建，即根据deoB基因编码序列，合成两对扩增deoB基因编码区片段的引物，通过PCR定点突变法在野生型deoB基因编码区SEQ ID NO:1中引入点突变，得到突变的deoB基因编码区核苷酸序列SEQ ID NO:2，记为deoB^(G1049A)。

14. 根据权利要求13所述的重组菌株的构建方法，所述步骤（1）中，所述引物为：

P1: 5' CGGGATCCATGGACGGCAACGCTGAAG 3'

P2: 5' GATCGTAACCGTGGTCAG 3'

P3: 5' CTGACCACGGTTACGATC 3'

P4: 5' AAGGAAAAAAGCGGCCGCGCTCGTGAGTGCGGATGT 3'。

15.如权利要求6-9任一项所述的重组菌株在发酵制备L-苏氨酸或者提高L-苏氨酸发酵量中的应用。