[发明专利]一种中药粉防己的组培快繁方法

说明书

本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种中药粉防己的组培快繁方法，旨在解决现有技术扦插繁殖存在周期长、繁殖系数低等缺点。所述组培快繁方法包括依次进行的如下步骤：获取粉防己植株的外植体、外植体诱导培养、增殖培养、生根培养和移栽；所述的外植体诱导培养操作的外植体诱导培养基包括：WPM培养基、1.5～2mg/L ZT、0.2～0.4mg/L GA、10～20mg/L CH、25～30g/L蔗糖、3.0～4.0g/L琼脂、100～500mg/L PVP，pH为5.6～5.9。本发明选择粉防己带节茎段为外植体，经诱导培养、增殖培养、生根培养以及移栽等步骤，其诱导率达到了90％以上，成活率达到了90％以上，实现了粉防己的组培快繁，从而实现了本发明的目的。

技术领域

本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种中药粉防己的组培快繁方法。

背景技术

粉防己(Stephania tetrandra S.Moore)又名石蟾蜍、汉防己、白木香，为防己科千金藤属多年生落叶藤本植物，生于山坡、丘陵地带的草丛及灌木林缘。粉防己是常用重要中药，以根入药，其味苦，性寒，有利水消肿、祛风止痛之功效，主治水肿鼓胀、手足挛痛、湿热脚气、癣疥疮肿、高血压等症。粉防己碱(tetrandrine)和防己诺林碱(fangchinoline)为粉防己主要药效成分，它们的含量是粉防己相关药品质量控制的主要检测指标。近期研究表明，粉防己碱在抗癌方面也有突出表现。粉防己属野生品种，分布于江西、安徽、浙江、湖北、湖南、福建、广东、广西等地。粉防己块根生长慢，更新周期长，一株野生植株采挖后，留下的残根断茎要在地下生长8-10年才可进行第二次采挖，再生非常困难。由于连年掠夺性采挖，各产地野生资源已严重萎缩，目前主要由江西、安徽提供粉防已药材，其它产地供应量已逐渐消失或产出量甚微。

目前，对于粉防己的研究主要集中在其药效学、化学成分及其提取物含量测定方法等方面，资源评价及人工种植技术的相关研究开展较少，要想进行人工种植，首要解决的问题就是优良种质的选育、繁育和栽培技术问题。粉防己雌雄异株，相关研究表明，由于野生粉防己分布较散，所以野生条件下，雌株授粉较难，很难生成果实，因此采用种子繁殖难以扩大种植。而常规的扦插繁殖存在周期长、繁殖系数低等缺点，因此建立粉防己的组培快繁方法显得尤其迫切。目前，国内外尚未有粉防己组织培养技术的报道，也未有粉防己组培快繁专利的申请。

发明内容

本发明的目的是提供一种中药粉防己的组培快繁方法，选择粉防己带节茎段为外植体，经诱导培养、增殖培养、生根培养以及移栽等步骤，其诱导率达到了90％以上，移栽成活率达到了90％以上，实现了粉防己的组培快繁，从而实现了本发明的目的。

本发明提供的技术方案为：一种中药粉防己的组培快繁方法，包括依次进行的如下步骤：获取粉防己的外植体、外植体诱导培养、增殖培养、生根培养、移栽；所述的外植体诱导培养操作的外植体诱导培养基包括：WPM培养基、1.5～2mg/L ZT(玉米素)、0.2～0.4mg/L GA(赤酶素)、10～20mg/L CH(水解酪蛋白)、25～30g/L蔗糖、3.0～4.0g/L琼脂、100～500mg/L PVP(聚乙烯吡咯烷酮)，pH为5.6～5.9。

在上述的中药粉防己的组培快繁方法中，所述的外植体诱导培养操作的方法为：将采集得到的作为外植体的粉防己消毒后剪切成2.0～2.5cm的带节茎段并接种到诱导培养基中，置于25℃全黑暗培养40～45天即可诱导形成不定芽。

在上述的药粉防己的组培快繁方法中，所述的增殖培养操作所用到的增殖培养基包括：WPM培养基、1.5～2.5mg/L KT(激动素)、0.5～1.0mg/L GA(赤酶素)、20～30g/L蔗糖、3.5～4.0g/L琼脂、50～100mg/L PVP(聚乙烯吡咯烷酮)，pH为5.6～5.9。

在上述的中药粉防己的组培快繁方法中，所述的增殖培养操作具体为：将外植体诱导培养得到的不定芽切成长1.5～2.0cm的茎段并接种到增殖培养基中培养30～35天即可实现不定芽的增殖。