[发明专利]干扰长非编码RNA的siRNA在制备治疗乳腺癌药物中的应用

说明书

本发明属于基因工程领域，特别涉及长非编码RNA LCT‑AS1在乳腺癌中作为发生和转移的分子标记物且成为乳腺癌治疗靶点的潜在作用。通过改变长非编码RNA LCT‑AS1的表达对乳腺癌细胞的增殖、转移等产生影响，说明敲低长非编码RNA LCT‑AS1的表达能够抑制乳腺癌细胞的增殖、转移和细胞周期进展，促进凋亡。

技术领域

本发明属于基因工程领域，特别涉及干扰长非编码RNA的siRNA在制备治疗乳腺癌药物中的应用。

背景技术

乳腺癌（Breast Cancer, BC）是我国最常见的恶性肿瘤之一，也是全世界妇女癌症死亡的首要原因，随着手术、内分泌治疗、化疗和靶向治疗等综合性治疗手段的发展，乳腺癌的死亡率呈下降趋势，但仍是导致绝经后妇女癌症相关死亡的主要原因之一，占所有癌症死亡人数的23%。早期乳腺癌可通过治疗获得治愈效果，但由于女性对乳房的自我检查和临床检查的疏忽，绝大多数乳腺癌患者在初诊时已处于临床中晚期，即使综合运用以上治疗手段，仍有较高的复发转移风险，预后不容乐观。

芯片技术和全转录组测序技术研究发现人类基因组中能编码蛋白的RNA仅占 2%，其余的均为非编码RNA (non-coding RNA， ncRNA)。长非编码RNA（Long non-coding RNA,LncRNA）是一类长度超过200nt，无蛋白质编码能力的RNA 分子，在转录、转录后以及表观遗传水平广泛参与调控细胞的各种生命活动，其异常表达与恶性肿瘤的发生发展之间存在着密切联系。大量研究表明，lncRNA在乳腺癌的发生发展过程中发挥着重要的作用。例如，LncRNA AFAP1-AS1、ARNLA、ZNF469、DANCR达水平的升高和LncRNA H19、LncRNA GASS表达水平的降低与TNBC的预后不良有关。又如，LncRNA MALAT1调节了三阴性乳腺癌（TripleNegative Breast Cancer, TNBC）发生和进展的关键途径，高表达的MALAT1可以通过竞争性结合miR-34a/c-5p和miR-449a/b等靶向mRNAs来上调c-MET和SOX4的表达水平，进而促进了肿瘤细胞的增殖和转移。

发明内容

本发明发现LncRNA LCT antisense RNA 1(LCT-AS1)在乳腺癌组织中与邻近正常组织相比表达显著上调。研究发现过表达LncRNA LCT-AS1会促进乳腺癌细胞的增殖与转移，是乳腺癌的一个重要致癌因子，可作为乳腺癌发生和转移的潜在分子标记物和乳腺癌治疗的一个靶点，因此在预测和治疗乳腺癌方面具有良好的应用前景。

LncRNA LCT-AS1是一条长度为1862bp的LncRNA，是由发明人提供正常乳腺组织和乳腺癌组织标本，通过TCGA数据库分析和qPCR的检测筛选出的在乳腺癌组织中显著高表达的RNA。由本发明首次发现它在乳腺癌中的调控作用，具有新颖性。

本发明的目的是提供用于判断乳腺癌预后情况或作为乳腺癌治疗靶点的LncRNALCT-AS1，其核苷酸序列为SEQ ID NO:1，

本发明还涉及识别所述的长非编码RNA的标记物在制备判断乳腺癌治疗预后情况的诊断产品中的应用，所述的标记物包括但不限于：

（1）结合所述长非编码RNA的引物/引物组或荧光标记的结合所述长非编码RNA的引物/引物组；

（2）结合所述长非编码RNA的小分子化合物；

（3）结合所述长非编码RNA的生物大分子，所述的生物大分子包括但不限于：抗体或抗体功能片段、荧光标记的抗体或抗体功能片段、RNA结合蛋白或其功能片段、荧光标记的RNA结合蛋白或其功能片段。

所述的引物组或荧光标记的引物组的核苷酸序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示，

Primer F（SEQ ID NO：2）：

5’- CGGGAGGAAGATAAACGGGG-3’，