[发明专利]一组用于鉴别紫灵芝和赤灵芝菌种的特异性分子标记及鉴别方法和应用有效
| 申请号： | 201910917363.4 | 申请日： | 2019-09-26 |
| 公开（公告）号： | CN110564885B | 公开（公告）日： | 2021-05-18 |
| 发明（设计）人： | 卢江杰;刘玉洋;孟一君;何金宇;李振皓;王慧中;亢介玉 | 申请（专利权）人： | 杭州师范大学;浙江寿仙谷植物药研究院有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645 |
| 代理公司： | 杭州浙科专利事务所(普通合伙) 33213 | 代理人： | 刘元慧 |
| 地址： | 311121 浙江省杭*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一组 用于 鉴别 灵芝 菌种 特异性 分子 标记 鉴别方法 应用 | ||
1.一组用于鉴别紫灵芝和赤灵芝菌种的特异性分子标记，其特征在于该特异性分子标记的引物为GLMI001-F/R、GLMI002-F/R和GLMI003-F/R，各引物核苷酸序列如下：
上游引物GLMI001-F如SEQ ID No.1所示；
下游引物GLMI001-R如SEQ ID No.2所示；
上游引物GLMI002-F如SEQ ID No.3所示；
下游引物GLMI002-R如SEQ ID No.4所示；
上游引物GLMI003-F如SEQ ID No.5所示；
下游引物GLMI003-R如SEQ ID No.6所示。
2.一种利用权利要求1所述的用于鉴别紫灵芝和赤灵芝菌种的特异性分子标记的鉴别方法，其特征在于该鉴别方法包括以下步骤：
1）首先提取待测紫灵芝和赤灵芝菌种样本的基因组DNA为模板，利用特异性分子标记GLMI001-F/R、GLMI002-F/R和GLMI003-F/R进行PCR扩增得到扩增产物；
2）对步骤1）得到的扩增产物进行电泳检测，若电泳结果分别出现187bp、365bp和168bp的DNA条带，则待测样本为紫灵芝菌种；若电泳结果未出现187bp、365bp和168bp的DNA条带，则待测样本为赤灵芝菌种。
3.如权利要求2所述的用于鉴别紫灵芝和赤灵芝菌种的特异性分子标记的鉴别方法，其特征在于PCR扩增体系按总体积30μL：含Mg2+的10×PCR Buffer 3μL，10mmol/L dNTPs0.9μL，20μmol/L上游引物0.6μL，20μmol/L下游引物0.6μL，5 U/μLTaq酶0.5μL，浓度为50ng/μL 的DNA模板1μL，ddH2O 23.4μL。
4.如权利要求2所述的用于鉴别紫灵芝和赤灵芝菌种的特异性分子标记的鉴别方法，其特征在于PCR反应过程为：94℃预变性5分钟；30个循环：94℃变性30秒， GLMI001退火温度为54℃、GLMI002退火温度为60℃、GLMI003退火温度为61℃，复性45秒，72℃延伸90秒；最后72℃延伸10分钟。
5.权利要求1所述的用于鉴别紫灵芝和赤灵芝菌种的特异性分子标记GLMI001、GLMI002和GLMI003在紫灵芝和赤灵芝菌种鉴定中的应用。
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