[发明专利]一种新型的高分子纳米输送体系及其治疗神经损伤的制备方法

权利要求书

1.一种新型的高分子纳米输送体系，其特征在于：所述高分子纳米输送体系是由具有树枝状结构的聚赖氨酸-聚乙二醇嵌段共聚物组成。

2.如权利要求1所述的新型的高分子纳米输送体系，其特征在于：载有细胞因子模拟肽的树枝状聚合物为通过将细胞因子模拟肽连上叠氮，将聚乙二醇连上炔基，在铜离子催化下，叠氮和炔基之间的点击化学反应来将细胞因子模拟肽连接上去，其中，细胞因子模拟肽和聚乙二醇的比例为1:4。

3.一种如权利要求1或2所述的新型的高分子纳米输送体系治疗神经损伤的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)细胞因子模拟肽的合成

所述的细胞因子模拟肽是通过固相合成技术，以Fmoc化学策略制备含有叠氮基团的细胞因子模拟肽；

(2)Lys-G4为核的树枝状炔基化聚β-氨基酯的合成

聚乙二醇丙烯酸酯与炔丙胺发生Michael加成反应的炔基化的含有聚乙二醇的聚β-氨基酯；以1,2-双(2-氨基乙氧基)乙烷和Boc保护的赖氨酸为起始原料，通过发散合成法的酰胺化反应构建赖氨酸的树枝状分子Lys-G4；Lys-G4末端的氨基与聚β-氨基酯端基的丙烯酸酯发生Michael加成反应得到Lys-G4为核的树枝状炔基化聚β-氨基酯；

(3)细胞因子模拟肽偶联到树枝状炔基化聚β-氨基酯

通过点击化学反应将细胞因子模拟肽偶联到树枝状炔基化聚β-氨基酯。

4.根据权利要求3所述的新型的高分子纳米输送体系治疗神经损伤的制备方法，其特征在于：所述的细胞因子模拟肽的合成的具体操作如下：步骤1：(1)2-氯-三苯甲基氯树脂在固相反应管二氯甲烷溶胀；(2)氨基酸缩合，加入Fmoc-D-Pro-OH和DIEA的DMF溶液，室温反应2h；(3)甲醇封闭未反应的树脂；(4)脱Fmoc保护，加入20％哌DMF溶液反应30min；(5)氨基酸缩合，加入Fmoc-Arg(Pbf)-OH，HBTU和DIEA的DMF溶液，室温反应2h；(6)重复步骤(4-5)，依次进行Fmoc-Lys(Boc)-OH和Fmoc-azidolysine氨基酸缩合；(7)用三氟乙醇裂解液将氨基酸序列从树脂切下来；(8)环化氨基酸，加入HATU和DIEA的DMF溶液，并室温反应2h；(9)去除保护基，用TFA/TIPS/H₂O去除保护基；(10)粗产品经反相高效液相色谱分离纯化得到带有叠氮的脑源性神经营养因子(BDNF)模拟肽。

5.根据权利要求4所述的新型的高分子纳米输送体系治疗神经损伤的制备方法，其特征在于：所述的DIEA，HBTU用量皆为氨基酸摩尔量的两倍，TFA/TIPS/H₂O的比例为38:1:1，反向高效液相色谱柱为18C柱，流动相为乙腈和水。

6.根据权利要求3所述的新型的高分子纳米输送体系治疗神经损伤的制备方法，其特征在于：所述的Lys-G4为核的树枝状炔基化聚β-氨基酯的合成的具体操作如下：

a.氮气保护条件下，聚乙二醇丙烯酸酯(2.124g,3.54mmol)，炔丙胺(0.165g,3.54mmol)搅拌溶解在10mL氯仿中；反应数天后经无水乙醚沉淀得到炔基化的聚β-氨基酯；

b.在HBTU和HOBt为缩合剂的条件下，1,2-双(2-氨基乙氧基)乙烷和(S)-2,6-二叔丁氧羰基氨基己酸发生酰胺化反应得到Lys-G1Boc4；在三氟乙酸条件下，脱除Boc保护基，逐级发生酰胺化反应得到Lys-G4Boc32，最后再用三氟乙酸脱除保护基团得到Lys-G4；

c.Lys-G4溶解于二甲亚砜溶液，并缓慢加入炔基化聚β-氨基酯的二甲亚砜溶液中；在50摄氏度条件下，搅拌反应2天得到Lys-G4为核的树枝状炔基化聚β-氨基酯。

7.根据权利要求6所述的新型的高分子纳米输送体系治疗神经损伤的制备方法，其特征在于：所述的a.得到炔基化的聚β-氨基酯反应中，在反应为50℃反应6h，80℃反应12h，90℃反应24h。