[发明专利]一种鱿鱼墨汁抗氧化物质的低温粗提工艺

说明书

本发明提出了一种鱿鱼墨汁抗氧化物质的低温粗提工艺，取鱿鱼墨汁解冻，加入蒸馏水搅拌、洗涤，用粗滤布除去杂物后，加入鱿鱼内脏自溶液，自溶1‑2h后，灭酶，过滤，用碱液调pH，在搅拌下，加入磁性固定化复合酶进行酶解，循环搅拌，使酶与底物充分接触，用磁铁除去磁性固定化复合酶时终止反应；用酸液调pH，离心，收集沉淀；所得沉淀物经蒸馏水反复洗涤、离心，至洗涤水为中性，真空冷冻干燥，‑20℃保存。本发明所用的原料丰富易得，酶法固定化技术可重复使用，降低成本，低温处理使得产品氧化率降低，具抗氧化性的黑色素和墨汁多糖含量极高，该物质可用于制备抗氧化保健食品或药品。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种鱿鱼墨汁抗氧化物质的低温粗提工艺。

背景技术

近年来，随着我国远洋水产品捕捞业的发展，鱿鱼的捕捞量和国际鱿鱼来料加工的总量 已经达到了每年数十万吨，其中加工废弃物鱿鱼墨囊为鱿鱼体重的1.28％，数量相当可观。 据文献报道，墨囊中的鱿鱼墨汁抗氧化物质具有抗氧化，提高病人免疫力的作用和较强的抗辐射作用。

鱿鱼为软体动物门、头足纲、枪乌贼科海产动物。据报道，全世界鱿鱼的年捕捞量达 400万吨，我国是全世界捕捞量最高的国家之一。在鱿鱼的加工过程中，大多数加工厂将鱿鱼墨囊废弃，造成环境污染。鱿鱼墨囊主要成分为黑色素和蛋白多糖复合体，鲜墨汁中黑色素的含量约为20％，属于真黑色素，是一类吲哚醌的聚合体。九十年代伊始，日本学者 发现鱿鱼墨具有高效抗肿瘤活性(Sasaki J，et al，J Nutr Sci Vitaminol，1997，43(4)：455)， 并从中分离出有效成分肽聚糖(Takaya Y，et al，Biol Pharm，1994，17(6)：846)。目前，对鱿鱼墨蛋白多糖、肽聚糖等具活性物质已进行了大量研究，但尚未见鱿鱼墨汁抗氧化物质提取工艺的相关报道。

发明内容

本发明提供一种鱿鱼墨汁抗氧化物质的低温粗提工艺，采用自溶液和磁性固定化酶多级酶解，所用自溶液酶解完全，所用的酶法固定化技术可重复使用，降低成本，低温处理使得产品氧化率降低，具抗氧化性的黑色素和墨汁多糖含量极高，活性强，可用于制备抗氧化食品、保健食品或药品。

本发明提供一种鱿鱼墨汁抗氧化物质的低温粗提工艺，取鱿鱼墨汁解冻，加入蒸馏水搅拌、洗涤，用粗滤布除去杂物后，加入鱿鱼内脏自溶液，自溶1-2h后，灭酶，过滤，用碱液调pH至第一pH值，在搅拌下，加入磁性固定化复合酶进行酶解，循环搅拌，使酶与底物充分接触，用磁铁除去磁性固定化复合酶时终止反应；用酸液调pH至第二pH值，离心，收集沉淀；所得沉淀物经蒸馏水反复洗涤、离心，至洗涤水为中性，真空冷冻干燥，-20℃保存；

所述内脏自溶液的制备方法为：将鱿鱼内脏以1︰5比例加入去离子水，搅拌机绞碎得鱿鱼内脏自溶液，所述灭酶条件为105℃灭酶10min，所述鱿鱼墨汁与鱿鱼内脏自溶液的体积比为（5-10）:1；

所述磁性固定化复合酶的制备方法包括：

S1. 磁性纳米粒子的制备：在氮气氛中将六水氯化铁和四水氯化亚铁，升温到反应温度后滴加氨水，氮气保护下恒温反应2-5h，降至室温，将合成的磁性纳米粒子用去离子水洗涤多次，磁铁分离，待用；

S2. 固定化复合酶的制备：将食品级脂肪酶和食品级木瓜蛋白酶，用无菌水分别调节浓缩液，等体积混合后，加入海藻酸钠混合均匀，使得海藻酸钠为5wt%，用注射器吸取混合液，逐滴滴入3.5wt%CaCl₂溶液，制备固定化微球，交联12h之后，用无菌水洗净，研细至10-100nm，备用；

S3. 磁性固定化复合酶的制备：将磁性纳米粒子和氨水分别加入到去离子水中，升温至反应温度后滴加硅烷偶联剂，氮气保护恒温反应3-6h，加入固定化复合酶，继续反应2-3h，降至室温，将合成的磁性固定化复合酶用去离子水洗涤多次，磁铁分离，得到磁性固定化复合酶；